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NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的多通道微量分光光度計，具備一次同時檢測八個樣品的能力。其設(shè)計基于NanoDrop經(jīng)典平臺，采用微量樣品固定液滴方式，只需1–2 μL即可完成檢測，省去了傳統(tǒng)分光光度計對比色皿的依賴。NanoDrop Eight在核酸、蛋白質(zhì)以及其他生物分子的定量和純度分析中被廣泛使用。熟練掌握其使用方法，不僅能夠獲得準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，還能提高實驗效率和可靠性。
光學(xué)原理
光程通過液滴厚度控制，自動調(diào)整（1 mm、0.2 mm、0.05 mm），確保濃度從低到高都能覆蓋。
檢測波長范圍190–850 nm，滿足DNA、RNA、蛋白質(zhì)和小分子檢測需求。
主要特點
微量檢測：僅需1–2 μL。
高通量：一次可檢測八個樣品。
寬動態(tài)范圍：DNA可達2–27,500 ng/μL。
全波段掃描：用于檢測純度、結(jié)構(gòu)和雜質(zhì)。
適用范圍
核酸定量及純度檢測。
蛋白質(zhì)定量和純度檢測。
藥物溶解度研究與復(fù)合物分析。
環(huán)境和食品樣品中的生物分子檢測。
儀器檢查
確認(rèn)電源和操作系統(tǒng)運行正常。
檢查光學(xué)平臺是否清潔無殘留。
確保軟件已啟動并進入檢測界面。
樣品準(zhǔn)備
核酸、蛋白質(zhì)樣品需充分溶解，無沉淀和氣泡。
上樣前短暫離心，去除雜質(zhì)和氣泡。
濃度過高的樣品需要適當(dāng)稀釋。
參比準(zhǔn)備
選擇與樣品一致的緩沖液作為空白對照。
先用參比進行基線校正，再檢測樣品。
環(huán)境條件
室溫保持在20–25 ℃之間。
避免陽光直射與強烈震動。
打開電源，等待軟件加載。
選擇實驗?zāi)Ｊ剑ê怂?、蛋白、全波段等）?/p>
檢查光源狀態(tài)，確認(rèn)校正功能可用。
將1–2 μL緩沖液滴加到檢測平臺。
關(guān)閉平臺，點擊“空白”按鈕。
儀器自動記錄基線，用于后續(xù)數(shù)據(jù)修正。
使用移液槍吸取1–2 μL樣品。
將樣品緩慢滴加到平臺，避免氣泡。
關(guān)閉平臺，點擊“測量”按鈕。
儀器自動檢測并輸出濃度與純度比值。
記錄或?qū)С鰯?shù)據(jù)。
將多個樣品分別滴加至八個通道。
批量點擊“測量”，儀器自動完成同步檢測。
軟件自動生成表格數(shù)據(jù)。
每次檢測后，用無絨布和去離子水或70%乙醇擦拭檢測平臺。
確認(rèn)無殘留后再進行下一批次測量。
適用范圍：DNA、RNA、寡核苷酸。
波長選擇：260 nm為主要檢測點，230 nm與280 nm用于純度評價。
數(shù)據(jù)解讀：
260/280 ≈ 1.8：DNA純度良好。
260/280 ≈ 2.0：RNA純度理想。
260/230 在2.0–2.2：說明鹽類或有機溶劑污染較少。
適用范圍：總蛋白、純化蛋白、標(biāo)簽蛋白。
波長選擇：280 nm處芳香族氨基酸吸收。
數(shù)據(jù)解讀：
260/280 ≈ 0.57：純蛋白樣品。
若比值偏高，提示核酸污染。
范圍：190–850 nm。
應(yīng)用：檢測雜質(zhì)、蛋白二級結(jié)構(gòu)、小分子結(jié)合位點。
使用方法：選擇“掃描模式”，設(shè)定掃描范圍與分辨率，儀器輸出完整光譜曲線。
方法：八通道同時上樣，點擊批量測量。
優(yōu)勢：數(shù)據(jù)自動整理，節(jié)省時間。
注意事項：確保每個通道樣品體積一致。
濃度計算
軟件根據(jù)比爾-朗伯定律自動計算樣品濃度，無需人工換算。
純度比值
260/280：用于判斷核酸與蛋白質(zhì)純度。
260/230：用于評估鹽類或有機物殘留。
數(shù)據(jù)保存
可保存為Excel、PDF或原始光譜文件。
建議建立實驗數(shù)據(jù)庫，長期追蹤樣品檢測記錄。
氣泡干擾
表現(xiàn)：結(jié)果波動大或濃度異常高。
解決：樣品上樣前離心，移液槍垂直滴加。
260/230比值偏低
原因：鹽類、苯酚或胍鹽污染。
解決：重新純化樣品。
濃度過高飽和
原因：光程縮短后仍超出檢測范圍。
解決：稀釋樣品后重新測量。
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