賽默飛(Thermo Fisher Scientific)BioMate 160 分光光度計(jì)是一款專為生命科學(xué)和基礎(chǔ)科研設(shè)計(jì)的高性能紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)。該設(shè)備廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白質(zhì)定量,酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),細(xì)胞生長(zhǎng)監(jiān)測(cè),以及常規(guī)分析實(shí)驗(yàn)中。BioMate 系列憑借操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)靈敏和重復(fù)性佳,在分子生物學(xué)、藥學(xué)、食品科學(xué)、臨床檢測(cè)等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用。
BioMate 160 在設(shè)計(jì)上注重實(shí)用性,支持自動(dòng)化校準(zhǔn)、多種檢測(cè)模式以及高精度光學(xué)系統(tǒng)。其光源覆蓋 190–1100 nm 波長(zhǎng)區(qū)間,能夠滿足紫外區(qū)(如核酸吸收峰 260 nm)和可見(jiàn)區(qū)(如蛋白質(zhì)染料法 595 nm)多種檢測(cè)需求,為實(shí)驗(yàn)室提供可靠的數(shù)據(jù)支撐。
BioMate 160 基于紫外-可見(jiàn)光分光光度原理。通過(guò)單色儀將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分離成單一波長(zhǎng),再經(jīng)過(guò)樣品池后由光電檢測(cè)器接收透射光強(qiáng)度,并轉(zhuǎn)化為電信號(hào)。根據(jù)信號(hào)強(qiáng)弱與參比光比較,即可得出樣品對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收值(A)。
吸光度與樣品濃度成正比(朗伯-比爾定律)。
在固定波長(zhǎng)下,通過(guò)測(cè)量吸光度可反推出溶液中目標(biāo)分子的濃度。
波長(zhǎng)范圍:190–1100 nm,覆蓋紫外至可見(jiàn)區(qū)。
波長(zhǎng)精度:±1 nm,確保測(cè)量可靠。
光譜帶寬:2 nm,兼顧分辨率和透光率。
光源系統(tǒng):氘燈(紫外區(qū))與鎢燈(可見(jiàn)區(qū))組合,保證全波段穩(wěn)定照射。
檢測(cè)模式:固定波長(zhǎng)檢測(cè)、掃描、定量分析、動(dòng)力學(xué)曲線、DNA/蛋白質(zhì)直接定量等。
自動(dòng)化功能:自動(dòng)波長(zhǎng)校準(zhǔn)、光程校正,支持多種比色皿規(guī)格。
快速核酸/蛋白質(zhì)定量,無(wú)需復(fù)雜操作。
支持酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)程。
軟件操作界面簡(jiǎn)潔,可直接輸出標(biāo)準(zhǔn)曲線與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
數(shù)據(jù)穩(wěn)定性高,減少重復(fù)測(cè)定的偏差。
在 260 nm 下檢測(cè)核酸濃度。
通過(guò) A260/A280 比值評(píng)估核酸純度(一般應(yīng)在 1.8–2.0)。
通過(guò) A260/A230 比值判斷是否有有機(jī)物或鹽類污染。
紫外吸收法:在 280 nm 測(cè)量蛋白中芳香族氨基酸殘基吸收。
染料結(jié)合法:如考馬斯亮藍(lán)法(595 nm)、雙縮脲法(562 nm)。
選擇反應(yīng)產(chǎn)物或底物的特定波長(zhǎng),連續(xù)記錄吸光度變化。
繪制酶速率曲線,獲得 Km、Vmax 等動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
在 600 nm 測(cè)定培養(yǎng)液的濁度(OD600)。
用于判斷細(xì)胞密度和生長(zhǎng)曲線。
色素含量檢測(cè)(如葉綠素、類胡蘿卜素)。
藥物降解與穩(wěn)定性分析。
水質(zhì)監(jiān)測(cè)與環(huán)境檢測(cè)。
為了充分發(fā)揮 BioMate 160 的性能,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需在樣品準(zhǔn)備、操作流程和數(shù)據(jù)分析等環(huán)節(jié)進(jìn)行優(yōu)化。
避免氣泡:比色皿內(nèi)的氣泡會(huì)導(dǎo)致光路受阻,應(yīng)輕輕震蕩去除。
濃度范圍合適:吸光度宜在 0.1–1.0 之間,過(guò)高需稀釋。
純度控制:樣品中雜質(zhì)會(huì)干擾吸收峰,必要時(shí)進(jìn)行純化。
溶劑匹配:對(duì)照液與樣品使用相同緩沖液,確??瞻仔?zhǔn)準(zhǔn)確。
預(yù)熱光源:氘燈與鎢燈需預(yù)熱 10–15 分鐘,以保證光源穩(wěn)定。
波長(zhǎng)選擇:應(yīng)選擇目標(biāo)分子特異性吸收峰,避免干擾。
比色皿選擇:核酸、蛋白檢測(cè)宜用石英比色皿(透過(guò)紫外區(qū)),常規(guī)檢測(cè)可用光學(xué)玻璃比色皿。
溫度控制:對(duì)酶動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn),需保持恒溫,避免因溫度波動(dòng)導(dǎo)致反應(yīng)速率偏差。
重復(fù)測(cè)量:每個(gè)樣品至少重復(fù)測(cè)定 3 次,取平均值。
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:對(duì)定量實(shí)驗(yàn),使用已知濃度系列標(biāo)準(zhǔn)品建立曲線。
動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè):動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)應(yīng)設(shè)定適當(dāng)采樣間隔(如 5–10 秒),確保曲線平滑。
背景扣除:排除緩沖液或空白樣品的背景吸收。
吸光度異常偏高
可能原因:比色皿有殘留、樣品濃度過(guò)高。
解決措施:清洗比色皿或稀釋樣品。
基線漂移
可能原因:光源未充分預(yù)熱,或比色皿表面有指紋/水滴。
解決措施:延長(zhǎng)預(yù)熱時(shí)間,保持比色皿清潔。
重復(fù)性差
可能原因:樣品混勻不足,操作不規(guī)范。
解決措施:每次取樣前充分混勻,避免分層。
A260/A280 比值偏離
可能原因:樣品被蛋白質(zhì)或有機(jī)物污染。
解決措施:進(jìn)一步純化核酸,重復(fù)檢測(cè)。
光源壽命問(wèn)題
氘燈壽命一般約 1000 小時(shí),應(yīng)定期檢查更換。
建議使用過(guò)程中避免頻繁開(kāi)關(guān),以延長(zhǎng)壽命。
在核酸提取實(shí)驗(yàn)中,常因殘留鹽離子或表面活性劑干擾,導(dǎo)致比值異常。通過(guò)嚴(yán)格控制洗脫液體積,并在測(cè)定前使用離心步驟去除雜質(zhì),顯著提高了測(cè)定的準(zhǔn)確性。
實(shí)驗(yàn)初期發(fā)現(xiàn)速率曲線波動(dòng)大,經(jīng)分析為溫度不穩(wěn)所致。后續(xù)在比色皿外配置恒溫循環(huán)系統(tǒng),曲線重現(xiàn)性明顯改善。
在 OD600 測(cè)定時(shí),因細(xì)胞團(tuán)聚導(dǎo)致數(shù)值偏差。通過(guò)輕柔震蕩分散細(xì)胞后再檢測(cè),曲線更加平滑且符合生長(zhǎng)規(guī)律。
BioMate 160 不僅是科研實(shí)驗(yàn)室的重要工具,也在教學(xué)中具有獨(dú)特優(yōu)勢(shì):
科研價(jià)值:適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)等多學(xué)科研究,為實(shí)驗(yàn)提供定量依據(jù)。
教學(xué)價(jià)值:直觀展示光譜學(xué)原理,幫助學(xué)生理解吸收與濃度關(guān)系。
跨學(xué)科應(yīng)用:既可服務(wù)于基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn),也能滿足生命科學(xué)研究需求。
隨著科研需求的提升,BioMate 160 的應(yīng)用也不斷拓展:
與信息化結(jié)合:通過(guò)與實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)對(duì)接,實(shí)現(xiàn)數(shù)據(jù)云存儲(chǔ)和共享。
小樣本檢測(cè)優(yōu)化:未來(lái)將進(jìn)一步支持微量樣品檢測(cè),如低至 1–2 μL 的核酸檢測(cè)。
自動(dòng)化擴(kuò)展:與自動(dòng)進(jìn)樣器聯(lián)用,提升高通量實(shí)驗(yàn)效率。
賽默飛 BioMate 160 分光光度計(jì)以其高精度、穩(wěn)定性和多功能性,成為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)和科學(xué)研究的重要工具。通過(guò)優(yōu)化樣品制備、操作流程和數(shù)據(jù)處理,可以最大限度地發(fā)揮儀器性能,提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。在科研和教學(xué)中,它不僅是一臺(tái)檢測(cè)設(shè)備,更是連接基礎(chǔ)原理與應(yīng)用實(shí)踐的橋梁。
杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司