賽默飛分光光度計NanoDrop Eight測試流程

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛推出的一款高性能多通道微量分光光度計，繼承了NanoDrop系列在核酸、蛋白質(zhì)等生物樣品微量檢測方面的優(yōu)勢，并通過八通道并行設計大幅提升了檢測效率。其測試流程設計兼顧高精度和簡便性，使研究人員能夠在分子生物學、蛋白質(zhì)組學、藥物研發(fā)和臨床檢測等多個領域快速獲得可靠數(shù)據(jù)。

測試流程是保證實驗結果準確性與可重復性的關鍵。本文將系統(tǒng)介紹NanoDrop Eight的標準測試流程，包括樣品準備、儀器開機與校準、檢測步驟、數(shù)據(jù)分析與結果輸出、維護與常見問題處理等，幫助科研人員全面掌握該設備的使用要點。

二、NanoDrop Eight的測試基本原理

1. 微量檢測理念

傳統(tǒng)分光光度計需要500 μL以上樣品，而NanoDrop Eight僅需1–2 μL即可完成檢測。其核心原理是利用兩根光纖臂之間的液體橋構成光路，光程固定且可自動調(diào)整。

2. 光程調(diào)節(jié)

NanoDrop Eight能根據(jù)樣品濃度自動選擇合適的光程（1 mm、0.2 mm或0.05 mm），保證在寬濃度范圍內(nèi)保持檢測精度。

3. 光電檢測

樣品對紫外-可見光的吸收由硅光二極管陣列檢測，輸出電信號，再結合朗伯-比爾定律計算濃度。

4. 八通道并行

儀器配置8個檢測通道，可同時檢測8個樣品，極大提升實驗效率，適合高通量研究。

三、測試前準備

1. 樣品制備

• 體積：每個檢測點通常需要1–2 μL樣品；

• 濃度：DNA樣品范圍2–15,000 ng/μL，蛋白質(zhì)范圍0.1–200 mg/mL；

• 純度：避免沉淀、雜質(zhì)或氣泡，以免影響光路。

2. 清潔與校準

• 清潔平臺：用無核酸酶水或70%乙醇擦拭檢測平臺，確保無殘留；

• 空白對照：準備與樣品相同的緩沖液或溶劑作為基線校正。

3. 軟件準備

• 啟動NanoDrop Eight軟件；

• 選擇檢測模式（核酸、蛋白質(zhì)、熒光標記物、動力學等）；

• 建立實驗項目文件夾，便于數(shù)據(jù)保存和管理。

四、標準測試流程

1. 開機與初始化

• 打開主機電源；

• 連接電腦與軟件，確認儀器狀態(tài)正常；

• 進行波長與光程自檢，系統(tǒng)自動完成光學校準。

2. 空白校正

• 在每個通道加1–2 μL緩沖液；

• 關閉光纖臂，點擊“Blank”進行空白測定；

• 軟件自動保存空白值，作為后續(xù)樣品檢測的基線。

3. 樣品加載

• 在檢測平臺中心滴加樣品；

• 確保液滴覆蓋光纖接觸點，避免氣泡；

• 關閉光纖臂，等待光路穩(wěn)定。

4. 樣品測定

• 點擊“Measure”開始檢測；

• 軟件實時顯示吸光度譜圖及濃度結果；

• 可設置重復測量，提升數(shù)據(jù)可靠性。

5. 通道切換與批量檢測

• NanoDrop Eight支持自動切換通道；

• 可一次性加載8個樣品并同時檢測；

• 軟件可批量生成報告。

五、數(shù)據(jù)分析與結果輸出

1. 吸光度與濃度計算

• DNA濃度通過260 nm吸光度計算；

• 蛋白質(zhì)濃度通過280 nm吸光度或特定方法（BCA、Bradford）；

• 軟件自動完成濃度換算。

2. 純度判斷

• 核酸純度：260/280 比值應在1.8–2.0之間；

• 蛋白質(zhì)純度：260/280 比值一般約為0.6；

• 額外比值（260/230）用于判定有機溶劑或鹽離子污染。

3. 標準曲線與定量分析

• 可建立標準品濃度曲線；

• 自動擬合并輸出R2值，保證定量準確性。

4. 數(shù)據(jù)存儲與導出

• 支持Excel、PDF、CSV等格式導出；

• 可直接上傳至實驗室數(shù)據(jù)庫；

• 結果帶有時間戳，方便追溯。

六、不同應用場景的測試流程

1. DNA/RNA檢測

• 空白對照：使用TE緩沖液；

• 測定波長：260 nm；

• 輸出結果：濃度（ng/μL）、純度比值。

2. 蛋白質(zhì)檢測

• 空白對照：PBS或樣品緩沖液；

• 測定波長：280 nm或顯色法特定波長；

• 輸出結果：濃度（mg/mL）、線性擬合曲線。

3. 多通道高通量檢測

• 一次加載8個樣品；

• 軟件批量生成檢測報告；

• 適用于基因測序前建庫檢測或臨床批量樣品分析。

七、提高測試精度的操作要點

1. 避免交叉污染：每次檢測后用無核酸酶水清潔平臺；

2. 控制樣品體積：過量或不足均會影響結果；

3. 重復檢測：關鍵樣品建議檢測3次，取平均值；

4. 定期校準：使用標準核酸或蛋白溶液進行性能驗證；

5. 記錄實驗條件：溫度、緩沖液成分應如實記錄。

八、維護與常見問題

1. 平臺殘留問題

• 現(xiàn)象：樣品殘留導致后續(xù)檢測值偏高；

• 解決：用無塵紙和乙醇清潔，必要時多次沖洗。

2. 光程異常

• 現(xiàn)象：濃度超出范圍或結果不穩(wěn)定；

• 解決：檢查光纖臂，確認光程校準是否正常。

3. 氣泡干擾

• 現(xiàn)象：譜圖出現(xiàn)異常波動；

• 解決：重新加樣，避免用力過大造成氣泡。

4. 數(shù)據(jù)保存丟失

• 現(xiàn)象：未能找到實驗數(shù)據(jù)；

• 解決：確認保存路徑，建議開啟自動保存功能。

九、與傳統(tǒng)檢測方法對比

從表中可以看出，NanoDrop Eight不僅提高了測試效率，還在樣品消耗和結果精度方面顯著優(yōu)于傳統(tǒng)方法。

十、結論

賽默飛NanoDrop Eight分光光度計以其微量檢測、八通道并行、自動光程調(diào)節(jié)和高靈敏度探測的優(yōu)勢，在液體樣品檢測中展現(xiàn)了高效、精準和穩(wěn)定的性能。通過科學規(guī)范的測試流程，科研人員能夠在最小樣品消耗條件下獲得可靠數(shù)據(jù)，適用于核酸、蛋白質(zhì)、藥物及臨床樣品等多種應用場景。

規(guī)范化的測試流程不僅提高了實驗精度與重復性，還使NanoDrop Eight成為實驗室高通量檢測的重要工具。掌握并優(yōu)化測試流程，將進一步釋放該儀器的潛能，為分子生物學和生命科學研究提供堅實的數(shù)據(jù)支持。