賽默飛分光光度計NanoDrop Eight實驗經(jīng)驗

一、前言

NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的多通道微量分光光度計，廣泛應(yīng)用于核酸、蛋白及細胞溶液等生物分子檢測。其最大的優(yōu)勢在于高通量測定，能夠同時檢測多達8個樣品，且僅需1~2 μL即可完成定量與純度分析。經(jīng)過大量實際使用，研究人員在樣品準備、檢測操作、數(shù)據(jù)分析和日常維護方面積累了豐富的經(jīng)驗，這些經(jīng)驗有助于避免常見錯誤，提高實驗的準確性和效率。

二、實驗前準備的經(jīng)驗

1. 儀器環(huán)境準備

• 將NanoDrop Eight放置在穩(wěn)固的實驗臺面，遠離震動源與強電磁干擾設(shè)備。

• 實驗室溫度保持在20~25℃之間，濕度控制在60%以下，以確保光學(xué)元件不受潮。

• 開機預(yù)熱3~5分鐘后再進行檢測，使光源達到穩(wěn)定狀態(tài)。

2. 樣品準備經(jīng)驗

• 核酸樣品：溶解于無RNA酶、無DNA酶的緩沖液或水中，避免使用高鹽緩沖液。

• 蛋白樣品：使用PBS或Tris緩沖液，避免高濃度去污劑或有機溶劑。

• 細胞或菌液樣品：需均勻混勻，避免沉淀。

• 建議樣品濃度控制在儀器檢測范圍內(nèi)，避免因濃度過高導(dǎo)致光程飽和。

3. 檢測平臺準備

• 每次檢測前先用無核酸酶水清洗測量平臺，并用無絨紙擦干。

• 對不同類型樣品，使用相應(yīng)的空白對照進行校正。

三、實驗檢測經(jīng)驗

1. 上樣操作

• 使用移液器準確吸取1.5~2 μL樣品，滴在檢測平臺中央。

• 避免樣品形成氣泡，氣泡會導(dǎo)致光散射和曲線畸變。

• 樣品覆蓋檢測窗口后，應(yīng)立即關(guān)閉上蓋，避免蒸發(fā)影響測定。

2. 測量模式選擇

• 核酸檢測模式：以260 nm為主波長，同時記錄260/280和260/230比值。

• 蛋白檢測模式：可直接測280 nm吸收，或選擇顯色法（BCA、Bradford等）。

• 細菌密度測定：在600 nm檢測，繪制生長曲線。

• 全光譜掃描：適用于未知樣品或需評估純度的情況，覆蓋190~850 nm。

3. 多通道測量經(jīng)驗

• NanoDrop Eight支持8通道同步檢測，適合處理大量樣品。

• 實驗經(jīng)驗表明，通道之間的差異極小，但為避免誤差，應(yīng)統(tǒng)一樣品體積和上樣方式。