NanoDrop Eight是賽默飛公司推出的一款多通道微量分光光度計,專門用于核酸、蛋白質(zhì)及其他生物分子的濃度與純度檢測。它繼承了NanoDrop系列“無需比色皿、僅需1–2 μL樣品即可完成檢測”的特點,并具備一次可測8個樣品的高通量能力。與傳統(tǒng)分光光度計相比,NanoDrop Eight在檢測靈敏度、樣品體積要求以及數(shù)據(jù)重復性方面都有明顯優(yōu)勢。然而,要確保數(shù)據(jù)準確性和可比性,合理設定并遵守測試條件至關重要。
微量光程設計
NanoDrop Eight采用表面張力固定液滴原理,將微量樣品滴在測量平臺上,自動形成約0.05–1 mm的光程。儀器可根據(jù)樣品濃度自動調(diào)整光程,實現(xiàn)寬動態(tài)范圍檢測。
光學檢測原理
儀器覆蓋190–850 nm波長范圍,氙閃光燈作為光源,檢測器為光電二極管陣列。通過比爾-朗伯定律,儀器將透射光強與濃度建立對應關系。
多通道同步檢測
儀器配有八個光學通道,可同時完成8個樣品的測量,提高檢測效率。
所謂測試條件,是指在NanoDrop Eight上進行檢測時,為保證結果準確、穩(wěn)定和可重復,需要滿足的樣品狀態(tài)、儀器環(huán)境和操作設定等一系列要求。具體包括:
樣品條件:樣品體積、濃度范圍、純度要求和緩沖體系。
儀器條件:光源狀態(tài)、光程設定、檢測模式選擇。
環(huán)境條件:溫度、濕度、清潔度。
操作條件:上樣方式、清洗步驟、基線校正。
體積范圍:NanoDrop Eight要求上樣體積在1–2 μL之間。體積過小可能導致液滴不穩(wěn)定,過大會產(chǎn)生溢出。
濃度范圍:
DNA/RNA:2–27,500 ng/μL
蛋白質(zhì)(BSA):0.06–200 mg/mL
濃度過高時,光程會自動縮短以避免信號飽和。
純度要求:核酸樣品常通過260/280、260/230比值判斷純度,雜質(zhì)過多會影響檢測準確性。
緩沖液成分:含有高鹽、苯酚、胍鹽等緩沖液可能干擾紫外吸收,需要合理選擇參比。
光源穩(wěn)定性:氙燈需要一定的預熱時間,建議開機后靜置幾分鐘再測量。
光程設定:NanoDrop Eight具備自動光程調(diào)節(jié)功能(1 mm、0.2 mm、0.05 mm),可根據(jù)樣品濃度調(diào)整。
校準狀態(tài):需定期進行基線校正和光路驗證。
溫度:最佳測試溫度為20–25 ℃。溫差過大會導致液滴蒸發(fā)過快。
濕度:避免在過干燥或過潮濕環(huán)境下操作,以免影響光程穩(wěn)定性。
操作環(huán)境:儀器應放置在無強烈氣流和震動的實驗臺上。
上樣技巧:移液槍應垂直滴加,避免氣泡混入。
表面清潔:每次檢測前后需用無絨布和去離子水或70%乙醇清潔檢測平臺。
空白設置:以與樣品相同的緩沖液作為參比,進行基線校正。
樣品準備
樣品需完全溶解,無沉淀和氣泡。
建議在冰上保存,防止核酸或蛋白降解。
濃度過高樣品應稀釋在合適范圍內(nèi),以避免光程壓縮過度。
儀器準備
確認儀器平臺清潔無殘留。
開機預熱后進行基線測量。
選擇合適的檢測模式(核酸、蛋白、全波段掃描等)。
實驗環(huán)境準備
保持實驗室溫度恒定。
避免陽光直射和實驗臺震動。
體積:1–2 μL
波長范圍:230 nm、260 nm、280 nm為主要檢測點
參比條件:使用樣品緩沖液
純度判定:260/280比值在1.8–2.0為純凈DNA,260/230比值在2.0–2.2為理想?yún)^(qū)間
體積:1–2 μL
波長:280 nm(芳香族氨基酸吸收峰)
緩沖液:不應含有高吸收背景的物質(zhì),如Tris、EDTA一般無干擾,但含有去污劑時需謹慎。
濃度范圍:0.06–200 mg/mL(BSA標準)。
波長范圍:190–850 nm
用途:檢測雜質(zhì)、結構特征、復合物形成等
樣品要求:需穩(wěn)定溶解,避免強熒光干擾。
多通道同時檢測:一次8個樣品
重復性保障:統(tǒng)一使用相同批次移液槍頭、同種緩沖液
清洗要求:每次測量后必須逐一清潔平臺,避免交叉污染
避免氣泡:樣品含氣泡會嚴重影響光程穩(wěn)定性,應在上樣前輕輕離心。
稀釋精度:對于高濃度樣品,稀釋倍數(shù)必須準確,以保證濃度結果可追溯。
基線校正頻率:建議每批實驗至少校正一次空白。
殘留影響:核酸和蛋白質(zhì)容易在檢測平臺形成薄膜,必須用乙醇擦拭干凈。
樣品保存:避免檢測過程中樣品長時間暴露在室溫,防止降解或蒸發(fā)。
核酸檢測優(yōu)化
對于低濃度樣品,可采用多次測量取平均值。
對于高鹽緩沖液,選擇相同成分的緩沖液作為空白。
蛋白質(zhì)檢測優(yōu)化
建立標準曲線,提高定量準確性。
使用兼容的緩沖液,避免去污劑帶來的背景吸收。
全波段掃描優(yōu)化
采用自動平滑功能,減少高頻噪聲。
在掃描前確認基線穩(wěn)定。
高通量檢測優(yōu)化
在同一批次實驗中保持相同的環(huán)境與操作條件。
使用自動化移液設備提升一致性。
分子生物學實驗
測試條件:260/280比值校正
應用:DNA提取后快速檢測純度,保證后續(xù)PCR成功率。
蛋白質(zhì)組學研究
測試條件:280 nm檢測,BSA標準曲線
應用:蛋白質(zhì)定量,確保上樣濃度統(tǒng)一。
藥物開發(fā)與質(zhì)量控制
測試條件:全波段掃描,190–850 nm
應用:檢測藥物分子與輔料的相互作用,判斷溶液穩(wěn)定性。
環(huán)境與食品檢測
測試條件:稀釋后核酸或蛋白檢測
應用:微生物污染監(jiān)測與檢測。
賽默飛分光光度計NanoDrop Eight的測試條件包括樣品體積、濃度范圍、光程設定、基線校正、緩沖液選擇及環(huán)境控制等多個方面。嚴格遵守這些條件,才能保證檢測數(shù)據(jù)的準確性、穩(wěn)定性和可重復性。不同實驗類型對測試條件的要求各有側重:核酸檢測強調(diào)260/280比值,蛋白質(zhì)檢測注重緩沖體系適配,全波段掃描關注雜質(zhì)與特征峰的識別。通過科學的實驗準備、細致的操作和及時的儀器維護,NanoDrop Eight能夠長期保持優(yōu)異性能,為科研與應用檢測提供可靠支持。
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