賽默飛分光光度計(jì) NanoDrop Eight 操作培訓(xùn)

一、培訓(xùn)目標(biāo)

NanoDrop Eight 是賽默飛世爾推出的新一代多通道超微量紫外-可見分光光度計(jì)。通過本次操作培訓(xùn)，參訓(xùn)人員將全面掌握以下技能：

1. 了解 NanoDrop Eight 的基本結(jié)構(gòu)與工作原理。

2. 掌握開機(jī)、校準(zhǔn)、樣品加載、數(shù)據(jù)采集和導(dǎo)出的完整流程。

3. 學(xué)會(huì)分析核酸、蛋白質(zhì)及其他樣品的檢測(cè)結(jié)果。

4. 解決常見操作問題，掌握日常維護(hù)要點(diǎn)。

5. 將理論與實(shí)際結(jié)合，能夠獨(dú)立完成樣品檢測(cè)并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

二、設(shè)備概述

1. 設(shè)計(jì)特點(diǎn)

• 八通道檢測(cè)：一次可檢測(cè) 8 個(gè)樣品，大幅提升效率。

• 超微量需求：每個(gè)樣品僅需 1–2 μL。

• 無(wú)比色皿設(shè)計(jì)：避免耗材浪費(fèi)，操作簡(jiǎn)便。

• 智能軟件系統(tǒng)：支持批量數(shù)據(jù)處理、報(bào)告生成和多用戶管理。

2. 主要組成

• 光學(xué)臂與檢測(cè)平臺(tái)：光源位于上臂，檢測(cè)窗口位于下平臺(tái)。

• 多通道檢測(cè)陣列：八個(gè)獨(dú)立測(cè)量孔。

• 觸控界面：用于選擇檢測(cè)模式和操作指令。

• 接口配置：USB、網(wǎng)絡(luò)接口，用于數(shù)據(jù)傳輸和軟件更新。

三、基礎(chǔ)原理

NanoDrop Eight 基于紫外-可見分光光度法：

• 光源發(fā)射特定波長(zhǎng)的光照射樣品。

• 樣品中的分子會(huì)在特定波長(zhǎng)吸收光。

• 探測(cè)器接收透過光或反射光信號(hào)，轉(zhuǎn)換為電信號(hào)。

• 系統(tǒng)根據(jù) Lambert-Beer 定律計(jì)算吸光度與濃度：
  $A=\epsilon ?c?l$
  其中 A 為吸光度，ε 為摩爾吸光系數(shù)，c 為濃度，l 為光程。
  由于 NanoDrop Eight 采用固定光程技術(shù)，無(wú)需比色皿即可獲得高精度數(shù)據(jù)。

四、操作步驟

1. 開機(jī)與預(yù)熱

• 連接電源，打開開關(guān)。

• 等待光源穩(wěn)定，約 2–3 分鐘。

2. 校準(zhǔn)

• 選擇“Blank”功能。

• 滴加 1–2 μL 空白緩沖液，關(guān)閉上臂進(jìn)行基線校正。

3. 樣品加載

• 使用移液器取 1–2 μL 樣品滴加至檢測(cè)平臺(tái)窗口。

• 避免產(chǎn)生氣泡，保證液滴完全覆蓋光路。

• 關(guān)閉上臂，準(zhǔn)備測(cè)定。

4. 選擇檢測(cè)模式

• 核酸模式：260 nm 吸光度，檢測(cè) DNA、RNA。

• 蛋白模式：280 nm 吸光度，檢測(cè)蛋白濃度。

• 全波長(zhǎng)掃描：190–850 nm，獲取光譜曲線。

• 熒光標(biāo)記檢測(cè)：450–650 nm，分析染料標(biāo)記分子。

5. 數(shù)據(jù)采集與展示

• 點(diǎn)擊“Start”，設(shè)備自動(dòng)完成掃描。

• 屏幕顯示濃度、吸光度、純度比值以及完整光譜。

6. 結(jié)果保存與導(dǎo)出

• 保存結(jié)果至本地存儲(chǔ)。

• 通過 USB 或網(wǎng)絡(luò)接口導(dǎo)出，支持表格和圖形化報(bào)告。

五、數(shù)據(jù)解讀

1. 核酸結(jié)果

• DNA 濃度：2–27,500 ng/μL。

• RNA 濃度：2–27,500 ng/μL。

• 純度比值：A260/A280 ≈ 1.8（DNA）、≈ 2.0（RNA）為合格。

2. 蛋白質(zhì)結(jié)果

• 濃度范圍：0.06–370 mg/mL。

• 純度比值：A260/A280 ≈ 0.6–0.7。

3. 雜質(zhì)檢測(cè)

• A260/A230：若顯著低于 2.0，提示有鹽類或有機(jī)物污染。

4. 光譜曲線

• 判斷峰形是否符合樣品特征。

• 分析是否存在背景干擾或異常吸收。

六、常見問題與解決方案

1. 樣品不穩(wěn)定

• 原因：樣品滴加不均勻或體積不足。

• 解決：確保移液器準(zhǔn)確取樣，液滴完整覆蓋窗口。

2. 純度比值異常

• 原因：溶液中含有蛋白或酚類污染。

• 解決：重新純化樣品或更換提取方法。

3. 信號(hào)偏低

• 原因：光學(xué)窗口污染或殘留物影響。

• 解決：用去離子水或 70% 乙醇清潔檢測(cè)平臺(tái)。

4. 重復(fù)性差

• 原因：樣品濃度過高導(dǎo)致飽和。

• 解決：適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)。

七、日常維護(hù)

1. 清潔
   每次測(cè)量后用無(wú)絨紙擦拭窗口，必要時(shí)用乙醇清洗。

2. 光源保護(hù)
   不使用時(shí)關(guān)閉設(shè)備，避免長(zhǎng)時(shí)間待機(jī)。

3. 定期校準(zhǔn)
   建議每周進(jìn)行一次性能驗(yàn)證。

4. 軟件更新
   定期檢查系統(tǒng)升級(jí)，保證數(shù)據(jù)處理功能完善。

八、案例演示

1. RNA 質(zhì)控

• 滴加 2 μL RNA 溶液，檢測(cè)結(jié)果 A260/A280 = 2.01。

• 數(shù)據(jù)表明樣品純度良好，可進(jìn)入測(cè)序?qū)嶒?yàn)。

2. 蛋白定量

• 檢測(cè) BSA 溶液，結(jié)果顯示 2.5 mg/mL。

• 與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比，誤差小于 2%。

3. 批量核酸檢測(cè)

• 同時(shí)檢測(cè) 8 個(gè) DNA 樣品。

• 軟件自動(dòng)生成對(duì)比報(bào)告，節(jié)省大量時(shí)間。

4. 熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)

• 樣品在 550 nm 出現(xiàn)峰值。

• 結(jié)果證明標(biāo)記成功，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

九、培訓(xùn)考核要點(diǎn)

1. 能否獨(dú)立完成樣品加載與檢測(cè)。

2. 是否正確解讀濃度與純度結(jié)果。

3. 是否能識(shí)別常見錯(cuò)誤并提出解決措施。

4. 能否在實(shí)驗(yàn)后正確清潔與關(guān)閉設(shè)備。

十、總結(jié)提升

通過培訓(xùn)，學(xué)員應(yīng)能熟練操作 NanoDrop Eight，理解其檢測(cè)原理，掌握核酸與蛋白質(zhì)的常規(guī)檢測(cè)方法，并具備分析和解決問題的能力。NanoDrop Eight 的優(yōu)勢(shì)在于：

• 檢測(cè)范圍廣，涵蓋核酸、蛋白質(zhì)及其他分子。

• 高通量能力強(qiáng)，可一次性完成 8 個(gè)樣品。

• 樣品需求量極少，適合寶貴實(shí)驗(yàn)材料。

• 操作簡(jiǎn)便，數(shù)據(jù)直觀，報(bào)告規(guī)范。

在科研、教學(xué)、臨床和工業(yè)應(yīng)用中，NanoDrop Eight 已成為實(shí)驗(yàn)室常用的高效檢測(cè)工具。