賽默飛分光光度計BioMate 160校正步驟詳解

一、引言

在分光光度分析中，儀器的校正是確保測量數(shù)據(jù)準確可靠的關鍵環(huán)節(jié)。賽默飛分光光度計BioMate 160作為一款精密的紫外-可見分光光度計，廣泛應用于生命科學、化學、環(huán)境和制藥等領域。由于實驗樣品濃度往往需要通過微小吸收差異來判斷，如果儀器未經(jīng)過嚴格校正，就可能導致結果偏差，甚至影響實驗結論。因此，定期和規(guī)范的校正是實驗室質(zhì)量控制體系的重要組成部分。

二、校正的基本意義

1. 保證數(shù)據(jù)準確性：通過校正消除儀器本身的誤差，確保吸光度和波長讀數(shù)與真實值一致。

2. 維持儀器穩(wěn)定性：長期使用后，光源衰減、光柵位置偏移、檢測器響應變化等都會導致測量誤差，校正能夠恢復穩(wěn)定性。

3. 符合標準規(guī)范：多數(shù)檢測方法和行業(yè)標準要求在樣品檢測前必須進行儀器校準，以確保結果的可比性。

4. 提高實驗可重復性：校正能減少不同批次實驗之間的系統(tǒng)誤差，使結果更具一致性。

三、BioMate 160的校正類型

賽默飛BioMate 160分光光度計通常涉及以下幾類校正：

1. 波長校正

• 目的：確保光柵輸出的單色光波長與儀器顯示的波長一致。

• 方法：利用已知吸收峰的標準物質(zhì)（如氫氧化釹濾光片、全程校正標準溶液）。

2. 吸光度校正

• 目的：確保儀器的吸光度測量與理論值或標準參考一致。

• 方法：通過校正標準濾光片或標準溶液進行。

3. 基線校正

• 目的：校正系統(tǒng)噪聲與背景吸收，保證測量以零點為參考。

• 方法：在無樣品比色皿或空白溶液條件下執(zhí)行。

4. 光度線性校正

• 目的：驗證儀器在不同濃度區(qū)間內(nèi)的吸光度響應是否保持線性。

• 方法：使用一系列已知濃度的標準溶液進行測量。

5. 雜散光校正

• 目的：去除非目標波長光對測量的干擾。

• 方法：采用特定濾光片或標準溶液檢測雜散光并進行修正。

四、校正前的準備工作

1. 儀器準備

• 確認BioMate 160已經(jīng)預熱（通常需預熱30分鐘），保證光源穩(wěn)定。

• 檢查光源壽命指示，若氘燈或鎢鹵素燈使用時間過長，應考慮更換。

• 確認比色皿室清潔，無灰塵或溶液殘留。

2. 標準物質(zhì)與工具準備

• 波長校正濾光片（如氫氧化釹濾片、鈥氧化物濾片）。

• 吸光度校正濾光片（中性濾光片或鈷、鉻標準溶液）。

• 高純水或?qū)嶒炓蟮目瞻兹芤骸?/p>

• 干凈的石英比色皿。

3. 軟件與模式準備

• 打開BioMate 160操作界面，進入“校正”或“驗證”功能模塊。

• 選擇所需校正項目，確認參數(shù)范圍。

五、詳細校正步驟

1. 波長校正步驟

1. 打開儀器并預熱。

2. 將氫氧化釹濾光片放入比色皿架。

3. 設定掃描范圍（200–800 nm）。

4. 執(zhí)行掃描，記錄濾光片吸收峰。

5. 將實測吸收峰位置與標準參考波長（如279.4 nm、362.0 nm、585.2 nm等）對比。

6. 若偏差超出允許范圍（通?！? nm），則調(diào)整或重新校正。

2. 吸光度校正步驟

1. 放置空比色皿，執(zhí)行基線校正。

2. 將標準中性濾光片置于光路中。

3. 測量其在指定波長下的吸光度。

4. 與濾光片標定值比較，若差異超限則校正系統(tǒng)光度因子。

3. 基線校正步驟

1. 在比色皿架中放置裝有溶劑的比色皿作為空白。

2. 設定目標波長或全波段掃描。

3. 執(zhí)行“零點調(diào)整”功能，使儀器輸出的吸光度曲線在基線上接近于零。

4. 光度線性校正步驟

1. 配制一系列不同濃度的標準溶液（如重鉻酸鉀）。

2. 分別測量其在特定波長下的吸光度。

3. 繪制濃度-吸光度標準曲線。

4. 驗證曲線是否保持良好線性（R2 ≥ 0.999為佳）。

5. 雜散光校正步驟

1. 選取對特定波長光高度吸收的溶液（如氯化鈉溶液）。

2. 在該波長處進行測量。

3. 如果檢測到透過光強度大于零，說明存在雜散光，需要校正光路。

六、注意事項

1. 比色皿清潔：使用前需用去離子水沖洗并擦干，避免指紋和殘液造成干擾。

2. 操作規(guī)范：插入濾光片和比色皿時動作輕柔，避免刮傷。

3. 環(huán)境條件：避免在強光直射、溫濕度過高的環(huán)境下校正。

4. 標準物質(zhì)保存：濾光片和標準溶液應妥善保存，避免老化或污染。

5. 數(shù)據(jù)記錄：每次校正結果應記錄存檔，以便追蹤和審核。

七、常見問題與排查

1. 波長偏差大：可能由光柵機械結構松動或濾光片老化引起，應檢查并更換。

2. 吸光度不穩(wěn)定：可能因光源燈管壽命接近極限或比色皿污染，應及時維護。

3. 基線漂移：檢查光源預熱是否充分，以及樣品室是否清潔。

4. 線性不佳：可能因標準溶液配制誤差或比色皿光程不一致導致。

5. 雜散光高：需要清潔光學系統(tǒng)或聯(lián)系廠家維修。

八、定期維護與校正周期

1. 每日：進行基線校正與空白檢查。

2. 每周：進行波長和吸光度驗證。

3. 每月：完成光度線性和雜散光檢測。

4. 每半年或一年：進行全面校正，必要時請專業(yè)工程師維護。

九、應用實例

1. 核酸定量：在檢測DNA/RNA濃度前，需先進行波長與基線校正，確保260 nm的準確性。

2. 蛋白質(zhì)分析：吸光度校正保證280 nm處的讀數(shù)可靠，避免濃度計算偏差。

3. 水質(zhì)檢測：光度線性校正有助于確保低濃度污染物檢測的靈敏度。

十、總結

賽默飛分光光度計BioMate 160的校正步驟涵蓋了波長、吸光度、基線、光度線性和雜散光等多個環(huán)節(jié)。嚴格按照操作規(guī)范進行校正，可以有效保證數(shù)據(jù)的準確性與穩(wěn)定性。校正不僅是一種操作程序，更是質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié)。通過科學的校正管理和定期維護，BioMate 160能夠長期保持最佳性能，為科學研究與應用檢測提供可靠的保障。