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分光光度法是一種常用的分析檢測手段，其準確性不僅依賴于儀器性能，還與樣品的性質(zhì)、處理方式和操作規(guī)范密切相關。賽默飛分光光度計BioMate 160作為一款高性能紫外-可見光分光光度計，廣泛應用于生命科學、醫(yī)學、環(huán)境及食品檢測中。為了確保實驗結(jié)果的可靠性，研究者在使用BioMate 160前必須嚴格遵循樣品制備與檢測要求。本文將對BioMate 160的樣品要求進行系統(tǒng)性梳理，以指導實驗人員更科學地開展檢測工作。
BioMate 160主要面向液體檢測，其典型樣品包括：
核酸樣品：DNA、RNA、寡核苷酸溶液。
蛋白質(zhì)樣品：總蛋白溶液、重組蛋白、多肽溶液。
酶反應體系：酶底物、產(chǎn)物及緩沖液組成的反應體系。
化學溶液：各種有機和無機溶液，如金屬離子顯色反應體系。
部分固體樣品可通過溶解、萃取或稀釋后檢測：
藥片及膠囊：經(jīng)提取液溶解后進行定量。
食品粉末：蛋白粉、維生素粉需溶于適宜溶劑。
環(huán)境樣品：土壤、沉積物需通過酸消解或有機溶劑萃取。
細胞裂解液：適用于蛋白和核酸的定量。
血液與血清樣品：需去除雜質(zhì)與蛋白沉淀。
發(fā)酵液與培養(yǎng)基：檢測代謝產(chǎn)物和營養(yǎng)成分。
DNA與RNA檢測常用范圍為2 ng/μL – 2000 ng/μL。
吸光度值在0.1–1.0之間時，定量結(jié)果最為可靠。
若濃度過高，應進行10–100倍稀釋，避免吸光度超出線性范圍。
紫外吸收法（280 nm）：適用濃度范圍為0.1 mg/mL – 10 mg/mL。
比色法（Bradford、Lowry等）：線性范圍一般在1 μg/mL – 100 μg/mL之間。
若樣品濃度過低，可通過濃縮或延長檢測時間提升信噪比。
常見顯色反應產(chǎn)物的檢測濃度范圍為μM – mM級。
建議檢測前繪制標準曲線，以校正濃度與吸光度之間的關系。
BioMate 160常用比色皿體積為1 mL – 3 mL。
標準光程為1 cm，特殊情況下可選用0.5 cm或2 cm光程比色皿。
對于貴重或難以制備的大分子樣品，可使用微量比色皿（50–100 μL）。
微量比色皿需保持樣品液面覆蓋光程窗口，避免氣泡干擾。
建議樣品體積**≥1 mL**，保證反應體系在長時間檢測中蒸發(fā)損失較小。
石英比色皿：適用于190–1100 nm全波段，推薦用于核酸與蛋白質(zhì)檢測。
玻璃比色皿：適用波長大于320 nm，不適合紫外區(qū)檢測。
塑料比色皿：適合一次性檢測，波長范圍受限（≥230 nm）。
使用前必須用去離子水和無水乙醇清洗并晾干。
避免殘留物或劃痕影響透光率。
樣品需保證透明無雜質(zhì)：
使用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。
對懸濁液需進行離心（12000 rpm，10 min）。
比色皿中氣泡會導致光程不均勻，建議檢測前輕輕震蕩或離心。
緩沖液：常用Tris-HCl、PBS等。
有機溶劑：乙醇、甲醇可用于某些小分子檢測，但需注意溶劑本身吸收峰。
對高濃度樣品進行稀釋，使吸光度保持在線性范圍。
對低濃度樣品使用離心濃縮或膜超濾。
樣品溫度應保持室溫，避免因溫度差異導致光譜漂移。
樣品應盡快檢測，避免因氧化或降解影響數(shù)據(jù)。
使用多個樣品時，盡量保持同一緩沖體系，減少背景差異。
在動力學實驗中，需先進行空白對照，確保體系穩(wěn)定。
可能原因：樣品濃度過大、氣泡干擾。
解決方法：稀釋樣品，檢查比色皿內(nèi)是否有氣泡。
可能原因：樣品濃度過低、光程不足。
解決方法：更換長光程比色皿或濃縮樣品。
可能原因：樣品中有懸浮顆?；虿僮鞑环€(wěn)定。
解決方法：過濾或離心去除雜質(zhì)，確保樣品均勻性。
可能原因：緩沖液或溶劑本身吸收。
解決方法：在相同條件下進行空白對照。
核酸與蛋白樣品可置于4 ℃冰箱中保存數(shù)小時至數(shù)天。
對于不穩(wěn)定的化學樣品，應現(xiàn)配現(xiàn)用。
核酸樣品可在-20 ℃保存數(shù)月。
蛋白質(zhì)樣品可添加甘油或保護劑，置于低溫保存。
避免反復凍融。
添加適量抑菌劑或抗氧化劑。
隨著科研需求的增長，BioMate 160在樣品處理和檢測方面可能會進一步優(yōu)化：
自動稀釋系統(tǒng)：減少人工操作誤差。
智能檢測模塊：自動識別樣品類型并推薦檢測條件。
微量檢測技術：降低樣品體積至納升級，滿足前沿研究需求。
賽默飛分光光度計BioMate 160作為一款應用廣泛的紫外-可見分光光度計，對樣品的濃度、體積、容器、前處理等方面都有明確的要求。只有嚴格遵循樣品制備規(guī)范，才能確保數(shù)據(jù)的準確性與可重復性?？蒲腥藛T在實驗中應結(jié)合不同檢測需求，靈活調(diào)整樣品處理方式，使BioMate 160的性能得到充分發(fā)揮。
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