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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司。
伯樂（Bio-Rad）Gene Pulser Xcell 電穿孔儀是一款高性能、高精度的電穿孔系統(tǒng)，用于將外源DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其他帶電分子導(dǎo)入細(xì)胞。該設(shè)備廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、基因工程、細(xì)胞治療、疫苗開發(fā)及基礎(chǔ)科研等領(lǐng)域。其核心原理是通過短時(shí)高電壓脈沖在細(xì)胞膜上產(chǎn)生瞬時(shí)性可逆孔道，使外源分子跨膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。
電穿孔的成功不僅取決于設(shè)備性能，還依賴于操作的規(guī)范性與參數(shù)的準(zhǔn)確設(shè)定。為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性與安全性，Gene Pulser Xcell 電穿孔儀的操作應(yīng)遵循嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)流程，包括設(shè)備檢查、樣品準(zhǔn)備、參數(shù)設(shè)置、放電操作、數(shù)據(jù)記錄與維護(hù)清理。
本文詳細(xì)介紹該儀器的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟、安全規(guī)范、常見問題及優(yōu)化建議，幫助研究人員高效、安全地開展實(shí)驗(yàn)。
Gene Pulser Xcell 系統(tǒng)采用模塊化設(shè)計(jì)，包含以下主要部件：
主控單元（Main Unit）：負(fù)責(zé)參數(shù)設(shè)定、電壓控制、時(shí)間記錄和波形輸出。
電容模塊（Capacitance Extender）：調(diào)節(jié)放電時(shí)間與能量密度，適用于不同細(xì)胞類型。
脈沖控制模塊（Pulse Controller）：用于高電阻或高電壓實(shí)驗(yàn)，調(diào)節(jié)電流與時(shí)間常數(shù)。
電極腔體（Cuvette Chamber）：安置樣品電極杯，提供安全的放電環(huán)境。
電極杯（Cuvette）：承載細(xì)胞懸液與導(dǎo)入分子，常見間距為0.1 cm、0.2 cm和0.4 cm。
顯示與控制面板：提供參數(shù)顯示、電流監(jiān)控、時(shí)間常數(shù)反饋及運(yùn)行狀態(tài)指示。
系統(tǒng)支持**指數(shù)衰減波（Exponential Decay）與方波（Square Wave）**兩種脈沖模式，適配原核與真核細(xì)胞的不同特性。
保持實(shí)驗(yàn)臺(tái)面干燥、整潔、絕緣。
周圍不得有水源、易燃品或高壓設(shè)備。
環(huán)境溫度建議控制在18–28°C，相對(duì)濕度低于70%。
僅限經(jīng)過培訓(xùn)、熟悉設(shè)備結(jié)構(gòu)與安全規(guī)范的人員使用。
實(shí)驗(yàn)時(shí)穿戴防護(hù)眼鏡、實(shí)驗(yàn)服、絕緣手套。
不得在設(shè)備通電狀態(tài)下更換電極或接線。
啟動(dòng)電源后，系統(tǒng)自動(dòng)執(zhí)行自檢程序，檢查電壓模塊、電容狀態(tài)與安全鎖裝置。若發(fā)現(xiàn)異常提示，應(yīng)立即停止操作并排查。
確保電極杯干燥無水跡；
檢查電極板是否有腐蝕或沉積物；
如有雜質(zhì)應(yīng)以無離子水清洗并晾干；
禁止重復(fù)使用一次性電極杯。
樣品應(yīng)經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化預(yù)處理，包括細(xì)胞收集、緩沖液洗滌、DNA/RNA純化等步驟。所有樣品需預(yù)冷至4°C，以防止過熱。
接通電源，設(shè)備顯示面板亮起。
確認(rèn)安全指示燈處于綠色狀態(tài)。
選擇合適的放電模式：指數(shù)波或方波。
設(shè)置實(shí)驗(yàn)參數(shù)：電壓、電容、電阻、脈沖時(shí)間及次數(shù)。
在主機(jī)控制面板上依次完成以下設(shè)定：
| 參數(shù) | 推薦范圍 | 功能說明 |
|---|---|---|
| 電壓（V） | 10–3000 V | 決定電場(chǎng)強(qiáng)度 |
| 電容（μF） | 25–3275 μF | 控制放電能量與持續(xù)時(shí)間 |
| 電阻（Ω） | 50–1000 Ω | 調(diào)節(jié)電流流量 |
| 脈沖時(shí)間（ms） | 0.05–100 ms | 決定能量作用時(shí)間 |
| 脈沖次數(shù) | 1–10 次 | 增強(qiáng)導(dǎo)入率 |
| 間隔時(shí)間（s） | 0.1–10 s | 促進(jìn)細(xì)胞恢復(fù) |
設(shè)定完成后按“確認(rèn)”鍵保存，設(shè)備進(jìn)入待機(jī)狀態(tài)。
在無菌冰上混合細(xì)胞懸液與外源分子溶液；
小心移入電極杯，體積應(yīng)充滿間隙且無氣泡；
擦拭杯壁，確保外部干燥；
插入電極腔體并鎖定位置。
確認(rèn)操作區(qū)無人接觸儀器；
按下“啟動(dòng)”鍵，系統(tǒng)開始放電；
顯示屏實(shí)時(shí)顯示電壓峰值與時(shí)間常數(shù)；
放電結(jié)束后，設(shè)備自動(dòng)進(jìn)入安全放電模式；
當(dāng)指示燈由紅轉(zhuǎn)綠后，方可取出樣品。
用無菌鑷子取出電極杯；
將樣品立即轉(zhuǎn)移至適宜培養(yǎng)基中修復(fù)細(xì)胞；
哺乳動(dòng)物細(xì)胞可置于37°C培養(yǎng)1小時(shí)，細(xì)菌或酵母需冰上恢復(fù)30分鐘再接種。
系統(tǒng)自動(dòng)保存當(dāng)前實(shí)驗(yàn)參數(shù)，可在菜單中查看或?qū)С觥＝ㄗh人工記錄以下數(shù)據(jù)：
樣品編號(hào)、細(xì)胞類型、DNA量；
電壓、電容、電阻、時(shí)間常數(shù)；
脈沖波形、次數(shù)及間隔；
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與觀察現(xiàn)象。
電極杯插入前必須確認(rèn)主機(jī)處于待機(jī)狀態(tài)。
禁止在設(shè)備通電時(shí)接觸電極、樣品腔或高壓端。
每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，等待“安全”指示燈亮起方可取樣。
若樣品濺出或杯體破裂，應(yīng)立即關(guān)閉電源并擦拭殘液。
定期檢查電源線及接地裝置，防止漏電。
使用低離子緩沖液以減少電解和氣體生成。
若出現(xiàn)報(bào)警或錯(cuò)誤代碼，應(yīng)停止操作，按說明書查找原因。
| 樣品類型 | 模式 | 電壓(V) | 電容(μF) | 脈沖時(shí)間(ms) | 電極間距(cm) | 備注 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 大腸桿菌 | 指數(shù)波 | 1250 | 25 | 5 | 0.1 | 高電壓短脈沖 |
| 酵母 | 指數(shù)波 | 250 | 500 | 8 | 0.2 | 加1 M山梨醇 |
| CHO細(xì)胞 | 方波 | 300 | 1000 | 10 | 0.4 | 雙脈沖模式 |
| HeLa細(xì)胞 | 方波 | 250 | 800 | 10 | 0.4 | 常用轉(zhuǎn)染參數(shù) |
| 原生質(zhì)體 | 方波 | 200 | 1500 | 30 | 0.4 | 低電壓長脈沖 |
上述參數(shù)為經(jīng)驗(yàn)值，實(shí)際應(yīng)根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)、載體類型和緩沖條件進(jìn)行微調(diào)。
使用無離子水沖洗電極表面；
如有鹽析殘留，可用稀乙醇擦拭；
自然晾干或放入干燥箱保存。
關(guān)閉電源并拔掉插頭；
擦拭外殼，防止灰塵堆積；
每月運(yùn)行一次自檢程序；
每6個(gè)月由專業(yè)人員進(jìn)行電壓校準(zhǔn)。
將實(shí)驗(yàn)參數(shù)及結(jié)果錄入電子表格；
記錄設(shè)備運(yùn)行時(shí)間與維護(hù)情況；
保存樣品編號(hào)與導(dǎo)入效果以便后續(xù)追蹤。
高電壓可提高導(dǎo)入效率，但過高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡率上升。建議逐步升壓試驗(yàn)，找到臨界值。
使用低電導(dǎo)率緩沖液，如10 mM HEPES + 250 mM蔗糖，可減少電解與氣泡生成。
在低溫環(huán)境下操作能減少熱損傷，尤其適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。
細(xì)胞密度過高會(huì)導(dǎo)致電場(chǎng)分布不均；過低則影響導(dǎo)入率。建議維持在10? cells/mL左右。
對(duì)于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞，可嘗試多脈沖設(shè)置，每次間隔≥1秒，讓細(xì)胞膜充分恢復(fù)。
| 現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決措施 |
|---|---|---|
| 出現(xiàn)電弧聲或閃光 | 樣品含鹽過高或有氣泡 | 更換緩沖液，去除氣泡 |
| 無放電反應(yīng) | 電極未接觸良好或安全鎖未閉合 | 重新插入電極杯，檢查腔體鎖扣 |
| 波形異常 | 模塊接觸松動(dòng) | 檢查擴(kuò)展模塊連接線 |
| 時(shí)間常數(shù)不穩(wěn)定 | 樣品電阻波動(dòng) | 使用新鮮細(xì)胞并檢查緩沖液純度 |
| 細(xì)胞死亡率高 | 電壓或脈沖時(shí)間過高 | 降低能量或縮短時(shí)間 |
| 轉(zhuǎn)染效率低 | 樣品DNA純度差或濃度不足 | 提高DNA質(zhì)量與濃度 |
電氣安全檢測(cè)：每月檢查接地電阻及漏電電流。
放電性能檢測(cè)：使用標(biāo)準(zhǔn)電阻負(fù)載，檢測(cè)電壓輸出曲線。
時(shí)間常數(shù)校準(zhǔn)：比較系統(tǒng)顯示值與外部測(cè)量值，偏差不超過±5%。
波形監(jiān)測(cè)：通過示波器驗(yàn)證方波或指數(shù)波的完整性。
結(jié)束所有放電操作后，等待5分鐘以確保內(nèi)部電容完全放電。
按下“電源關(guān)閉”鍵，切斷主電源。
拔掉電源線，防止長期待機(jī)造成電容老化。
記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)間與設(shè)備狀態(tài)。
Gene Pulser Xcell 電穿孔儀在出廠前經(jīng)過嚴(yán)格的電壓穩(wěn)定性、放電一致性和安全性檢測(cè)。廠家提供質(zhì)保3年只換不修服務(wù)，確保設(shè)備在高強(qiáng)度使用下保持性能穩(wěn)定。
用戶可享受以下售后支持：
免費(fèi)技術(shù)指導(dǎo)與操作培訓(xùn)；
電路與參數(shù)校準(zhǔn)服務(wù)；
故障診斷與整機(jī)更換；
消耗品與電極配件供應(yīng)。
伯樂Gene Pulser Xcell 電穿孔儀以其高精度控制、可編程波形和卓越的安全性能，成為電穿孔實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化工具。通過規(guī)范的操作流程和合理的參數(shù)設(shè)置，研究者可以實(shí)現(xiàn)高效率、高重復(fù)性和低損傷的外源分子導(dǎo)入。
整個(gè)操作過程應(yīng)遵循以下原則：
安全第一：嚴(yán)格防止高壓觸電與樣品泄漏；
精確設(shè)定：根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整電壓、電容和波形；
數(shù)據(jù)可追溯：保存實(shí)驗(yàn)記錄，確保結(jié)果可重復(fù)；
規(guī)范維護(hù)：定期清潔、校準(zhǔn)和檢測(cè)設(shè)備。
通過科學(xué)的操作與持續(xù)優(yōu)化，Gene Pulser Xcell 電穿孔儀能夠在基因編輯、疫苗開發(fā)、細(xì)胞治療等前沿領(lǐng)域發(fā)揮強(qiáng)大作用，為生命科學(xué)研究提供可靠的技術(shù)支持。
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杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
