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伯樂（Bio-Rad）電穿孔儀165-2661是一款高性能電轉(zhuǎn)化儀器，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細胞工程、基因?qū)爰暗鞍踪|(zhì)跨膜研究等領(lǐng)域。
其核心原理是通過短時間高電壓脈沖作用，使細胞膜形成暫時性可逆孔洞，從而實現(xiàn)外源DNA、RNA或蛋白質(zhì)進入細胞內(nèi)部的目的。
本視頻講解以“理論+實操結(jié)合”的形式，詳細演示165-2661的操作全過程，包括設(shè)備結(jié)構(gòu)介紹、參數(shù)設(shè)置、樣品制備、放電實驗、數(shù)據(jù)讀取與清潔維護等環(huán)節(jié)。
通過該視頻內(nèi)容，科研人員可全面掌握電穿孔實驗的操作要點、安全規(guī)范及優(yōu)化技巧，實現(xiàn)高重復(fù)性和高成功率的實驗結(jié)果。
操作視頻全程約分為八個章節(jié)，總時長約25分鐘。每個章節(jié)均采用高清錄制和分步講解方式，輔以字幕說明和參數(shù)示例，確保觀眾能夠準確理解每一個操作步驟。
章節(jié)結(jié)構(gòu)如下：
儀器總體介紹與原理講解
實驗前準備與環(huán)境要求
樣品制備與電轉(zhuǎn)杯操作
參數(shù)設(shè)置與程序選擇
放電演示與實時監(jiān)控
實驗結(jié)果分析與數(shù)據(jù)導(dǎo)出
設(shè)備清潔與維護
常見問題與安全提示
以下為每一章節(jié)的詳細說明與解說內(nèi)容。
視頻開篇展示伯樂165-2661整機外觀，采用多角度鏡頭呈現(xiàn)設(shè)備結(jié)構(gòu)。
旁白講解主要包括以下內(nèi)容：
設(shè)備組成
主機系統(tǒng)：控制電壓、電容、時間常數(shù)及安全邏輯；
顯示面板：LCD液晶屏顯示實時參數(shù)；
功能按鍵：用于電壓設(shè)定、電容選擇和模式切換；
電極輸出口：連接電轉(zhuǎn)杯并傳導(dǎo)能量；
安全蓋：防止放電時電擊風(fēng)險；
散熱系統(tǒng)：保持內(nèi)部溫度穩(wěn)定。
工作原理說明
通過圖示動畫展示“充電—放電—電場形成—細胞膜穿孔—膜修復(fù)”的全過程。
旁白指出電穿孔的關(guān)鍵變量：
Vt=V0e?t/RCV_t = V_0 e^{-t/RC}Vt=V0e?t/RC
并解釋時間常數(shù)τ=RC的重要性，說明其對能量釋放與細胞存活率的影響。
本章節(jié)畫面切換至實驗臺，講解實驗前應(yīng)完成的準備工作。
室溫保持在20–25°C；
相對濕度≤60%；
桌面干燥平穩(wěn)，避免導(dǎo)電材料接觸；
設(shè)備背部距離墻體至少30 cm，以利于通風(fēng)。
畫面特寫顯示電源線、接地插口及電極接口。
講解人員提醒：
電源電壓需穩(wěn)定在AC 220V ±10%；
接地電阻≤1 Ω；
不得共用插座與加熱或離心設(shè)備。
操作員打開電源開關(guān)，屏幕顯示“System Checking”，系統(tǒng)自動檢測高壓模塊、電容組、安全蓋感應(yīng)與風(fēng)扇運行。
若顯示“Ready to Pulse”，表示設(shè)備狀態(tài)良好。
視頻中展示樣品制備流程，以大腸桿菌DH5α轉(zhuǎn)化實驗為例。
將菌株培養(yǎng)至OD???≈0.4；
離心去除培養(yǎng)基；
用冰冷10%甘油洗滌3次；
加入1–2 μg質(zhì)粒DNA，混勻后置冰上待用。
旁白強調(diào)：緩沖液導(dǎo)電性過高會導(dǎo)致電弧放電，因此必須使用低離子體系。
視頻中展示不同間隙的電轉(zhuǎn)杯規(guī)格：
| 間隙 | 樣品體積 | 適用體系 |
|---|---|---|
| 0.1 cm | 20–40 μL | 動物細胞、小體積實驗 |
| 0.2 cm | 80–100 μL | 細菌、酵母體系 |
| 0.4 cm | 300–400 μL | 植物原生質(zhì)體、大體積體系 |
操作員使用吸管加入樣品，輕拍電轉(zhuǎn)杯底部排除氣泡，并放置于冰上預(yù)冷。
本章節(jié)重點講解如何通過操作面板進行實驗參數(shù)設(shè)定。
按下“VOLTAGE”鍵，輸入電壓范圍0.2–2.5 kV。
視頻中展示典型設(shè)置：2.5 kV（適合細菌體系）。
按“CAP”鍵選擇25 μF檔位。
系統(tǒng)顯示屏同步更新：
makefile復(fù)制編輯VOLTAGE: 2.50kVCAP: 25μF
通過“MODE”鍵選擇SINGLE PULSE模式。
旁白講解：
SINGLE PULSE適用于細菌體系；
MULTI PULSE適用于哺乳細胞；
PROGRAM模式用于調(diào)用預(yù)設(shè)參數(shù)。
操作員按“ENTER”確認設(shè)置。
屏幕顯示：
vbnet復(fù)制編輯MODE: SINGLEREADY TO PULSE
本章節(jié)為視頻的核心內(nèi)容，展示整個放電過程。
操作員將裝好樣品的電轉(zhuǎn)杯插入電極槽，關(guān)閉安全蓋。
系統(tǒng)檢測安全鎖閉狀態(tài)后，綠燈亮起表示可放電。
按下“PULSE”鍵后，屏幕顯示：
makefile復(fù)制編輯CHARGING...VOLTAGE: 2.50kV
伴隨蜂鳴聲后，設(shè)備瞬時釋放高壓脈沖。
放電完成后屏幕自動顯示：
sql復(fù)制編輯COMPLETETIME CONST: 4.9ms
ARC: NONE
旁白解釋：
時間常數(shù)τ=4.9ms為理想結(jié)果，表示放電過程平穩(wěn)、能量釋放均勻。
視頻模擬錯誤操作情景，如樣品含鹽導(dǎo)致電弧。
屏幕提示“ARC DETECTED”，同時紅色指示燈閃爍。
解說說明應(yīng)立即停止實驗、重新制備樣品并清潔電極。
數(shù)據(jù)查看
操作員按“VIEW”鍵查看實驗記錄。屏幕顯示最近一次放電數(shù)據(jù)：
makefile復(fù)制編輯RUN #025V=2.50kV C=25μF
τ=4.8ms ARC: NONE
數(shù)據(jù)導(dǎo)出
插入USB存儲器后，選擇“EXPORT”功能，將數(shù)據(jù)導(dǎo)出為CSV文件。
視頻展示在電腦中打開實驗記錄表，包含日期、電壓、電容、時間常數(shù)及放電狀態(tài)。
結(jié)果分析
旁白說明：
時間常數(shù)穩(wěn)定性反映設(shè)備性能；
多次實驗中τ偏差<0.2ms說明系統(tǒng)可靠；
出現(xiàn)異常值應(yīng)排查樣品導(dǎo)電性或電極清潔度。
視頻畫面切換至實驗結(jié)束后的操作場景。
用去離子水或無水乙醇擦拭電極槽；
禁止使用酸堿性清洗劑；
電轉(zhuǎn)杯清洗后自然晾干。
使用干布擦拭儀器表面；
確保通風(fēng)口無灰塵堵塞；
每周清潔一次防塵濾網(wǎng)。
| 項目 | 周期 | 內(nèi)容 |
|---|---|---|
| 電壓校準 | 每6個月 | 使用高壓表檢測輸出精度 |
| 電容檢測 | 每年 | 測試儲能衰減率 |
| 風(fēng)扇維護 | 每季度 | 清除灰塵確保散熱通暢 |
| 安全蓋檢測 | 每季度 | 檢查感應(yīng)靈敏度 |
旁白總結(jié)：良好的清潔與保養(yǎng)是維持設(shè)備穩(wěn)定性能的關(guān)鍵。
視頻展示三種典型異常：
無放電：安全蓋未鎖緊或接地不良；
電弧放電：樣品含鹽或氣泡；
時間常數(shù)為零：電極接觸不良。
解說員逐項講解排查方法：檢查安全蓋狀態(tài)、電極清潔度、樣品電導(dǎo)率。
放電時嚴禁觸碰儀器；
樣品裝入前必須關(guān)閉電源；
不得自行拆解高壓模塊；
實驗后等待5秒確保電容完全放電再取出樣品。
視頻最后由講解員總結(jié)165-2661的核心操作要點：
規(guī)范的樣品準備：低鹽緩沖液、無氣泡、冰浴預(yù)冷；
正確的參數(shù)設(shè)置：根據(jù)細胞類型選擇電壓與電容；
嚴格的安全防護：操作過程中不觸碰設(shè)備與電極；
科學(xué)的數(shù)據(jù)分析：關(guān)注時間常數(shù)與放電曲線穩(wěn)定性；
定期維護與校準：保持設(shè)備長期可靠運行。
字幕提示：
“精準控制、規(guī)范操作、安全放電，是保證電穿孔實驗成功的三大要素?！?/span>
本操作視頻不僅適用于初次使用者的培訓(xùn)指導(dǎo)，也可作為實驗室標(biāo)準化教學(xué)資料，具有以下應(yīng)用意義：
培訓(xùn)用途
適合研究所、實驗教學(xué)中心及企業(yè)實驗室的入職培訓(xùn)使用；
質(zhì)量體系支持
可作為ISO或GLP實驗操作流程的可視化記錄；
科研展示與學(xué)術(shù)交流
便于向科研人員演示實驗原理與操作規(guī)范；
安全教育
強化操作員對高壓實驗風(fēng)險的認識，提升實驗安全意識。
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