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質(zhì)保3年只換不修，廠家長(zhǎng)沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司

一、前言

伯樂(lè)電穿孔儀 165-2661 是一款高性能電轉(zhuǎn)化儀器，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞工程、基因編輯及藥物遞送研究。
其核心功能是通過(guò)高壓瞬時(shí)脈沖改變細(xì)胞膜通透性，使外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。
為了確保實(shí)驗(yàn)的成功率與安全性，操作人員需熟悉本儀器的操作步驟、參數(shù)設(shè)置原則及維護(hù)要求。

二、儀器結(jié)構(gòu)與組成

1. 主機(jī)部分

• 高壓模塊：提供穩(wěn)定的脈沖電壓輸出，范圍 10–3500 V；

• 儲(chǔ)能電容：用于控制能量釋放速度與放電時(shí)間常數(shù)；

• 微處理控制單元：實(shí)現(xiàn)參數(shù)設(shè)定、自動(dòng)檢測(cè)、波形控制；

• 散熱系統(tǒng)：保持儀器內(nèi)部溫度穩(wěn)定，防止過(guò)熱；

• 控制面板：顯示電壓、電容、時(shí)間常數(shù)、放電模式與溫度信息。

2. ShockPod 電擊槽

• 與主機(jī)連接，用于容納電擊杯；

• 內(nèi)設(shè)安全蓋鎖系統(tǒng)，未閉合時(shí)無(wú)法放電；

• 可適配 0.1 cm、0.2 cm、0.4 cm 電擊杯。

3. 電擊杯

• 兩電極間距決定電場(chǎng)強(qiáng)度；

• 材質(zhì)為耐高壓聚碳酸酯或石英玻璃；

• 用于承載樣品，形成穩(wěn)定電場(chǎng)環(huán)境。

4. 連接線與安全配件

• 高壓導(dǎo)線連接主機(jī)與 ShockPod；

• 設(shè)有自動(dòng)放電電阻與接地線，保障安全。

三、操作前準(zhǔn)備

1. 環(huán)境要求

• 室溫 20–25 ℃，相對(duì)濕度 ≤ 70%；

• 環(huán)境應(yīng)干燥、無(wú)強(qiáng)電磁干擾；

• 工作臺(tái)需絕緣、防靜電。

2. 電源與接地

• 使用 AC 220 V ±10%，50/60 Hz 電源；

• 儀器必須可靠接地，接地電阻 ≤ 1 Ω；

• 禁止共用大功率設(shè)備插座。

3. 儀器檢查

• 檢查電擊槽、ShockPod 內(nèi)部是否干凈；

• 電擊杯無(wú)裂紋、干燥無(wú)水跡；

• 電纜接口牢固無(wú)松動(dòng)；

• 面板顯示與按鍵響應(yīng)正常。

4. 樣品準(zhǔn)備

1. 細(xì)胞狀態(tài)：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞；

2. 緩沖液：去離子水或低離子緩沖體系（電導(dǎo)率 0.5–1.5 mS/cm）；

3. 外源分子：DNA、RNA 或蛋白質(zhì)純度高、無(wú)鹽；

4. 混合比例：一般 DNA 加入量為 0.1–5 μg / 每 100 μL 樣品；

5. 預(yù)冷：樣品及電擊杯預(yù)冷至 0–4 ℃ 以減少熱效應(yīng)。

四、儀器啟動(dòng)與界面操作

1. 開機(jī)自檢

接通電源后，系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)電壓模塊、電容模塊、蓋鎖傳感器及溫控狀態(tài)。
若顯示 “SELF TEST PASSED”，表示儀器可正常運(yùn)行。

2. 主界面功能

屏幕顯示包括：

• Voltage（設(shè)定電壓）

• Capacitance（電容）

• Resistance（電阻）

• Time Constant（時(shí)間常數(shù)）

• Pulse Mode（波形模式）

• Status（運(yùn)行狀態(tài)）

通過(guò)旋鈕選擇參數(shù)，按“ENTER”確認(rèn)。

五、參數(shù)設(shè)置

1. 電壓設(shè)定

• 范圍：10–3500 V；

• 細(xì)菌體系：1800–2500 V；

• 酵母體系：1200–1600 V；

• 動(dòng)物細(xì)胞：400–800 V；

• 植物原生質(zhì)體：600–900 V。

2. 電容設(shè)定

• 范圍：25–3275 μF；

• 電容越大，放電時(shí)間越長(zhǎng)；

• 一般推薦時(shí)間常數(shù) τ = 4–8 ms；

• 細(xì)菌多用 25 μF，哺乳動(dòng)物細(xì)胞 500–1000 μF。

3. 電阻與波形

• 電阻：50–600 Ω，可自動(dòng)匹配；

• 波形：指數(shù)衰減波或方波，按實(shí)驗(yàn)體系選擇；

• 脈沖次數(shù)：1–10 次，間隔 0.5–2 秒。

4. 參數(shù)保存

設(shè)置完畢后選擇 “SAVE PROTOCOL”，輸入方案編號(hào)并保存，便于下次調(diào)用。

六、電擊操作流程

步驟 1：樣品裝入電擊杯

• 取 0.1–0.4 cm 間距的電擊杯；

• 將樣品加入，不超過(guò)最大容量的 80%；

• 去除氣泡，以免電弧；

• 蓋上蓋子并放入 ShockPod 槽內(nèi)。

步驟 2：蓋鎖檢測(cè)

合上蓋子，儀器檢測(cè)蓋鎖狀態(tài)并提示 “LID CLOSED – READY”。
未鎖定時(shí)禁止放電。

步驟 3：放電執(zhí)行

1. 按 “PULSE” 鍵充電；

2. 當(dāng)屏幕提示 “READY TO PULSE” 時(shí)按 “ENTER”；

3. 儀器釋放高壓脈沖，同時(shí)記錄實(shí)際電壓與時(shí)間常數(shù)；

4. 放電完成后提示 “COMPLETE”；

5. 系統(tǒng)自動(dòng)放電并冷卻。

步驟 4：樣品回收

等待 10 秒確認(rèn)無(wú)殘余電荷；
取出電擊杯，立即將樣品轉(zhuǎn)入恢復(fù)液或培養(yǎng)基中；
輕輕混勻后按實(shí)驗(yàn)需求培養(yǎng)。

七、不同體系的操作參數(shù)參考

以上參數(shù)為參考值，可根據(jù)細(xì)胞種類、電導(dǎo)率與樣品濃度微調(diào)。

八、實(shí)驗(yàn)后處理

1. 細(xì)菌與酵母

• 放電后立即加入 1 mL 預(yù)溫培養(yǎng)液；

• 30–60 分鐘恢復(fù)；

• 涂布平板培養(yǎng)。

2. 動(dòng)物細(xì)胞

• 轉(zhuǎn)入含血清培養(yǎng)基；

• 37 ℃、5% CO? 條件下培養(yǎng)；

• 1–2 小時(shí)后更換新鮮培養(yǎng)基。

3. 植物原生質(zhì)體

• 放電后轉(zhuǎn)入含甘露醇的緩沖液；

• 靜置 1 小時(shí)后進(jìn)行培養(yǎng)或分析。

九、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄

1. 自動(dòng)記錄

儀器自動(dòng)保存以下數(shù)據(jù)：

• 設(shè)定與實(shí)際電壓；

• 時(shí)間常數(shù) τ；

• 放電次數(shù)與波形類型；

• 能量釋放百分比；

• 電容、電阻值。

2. 數(shù)據(jù)導(dǎo)出

通過(guò) USB 接口導(dǎo)出 CSV 文件，包含每次實(shí)驗(yàn)的運(yùn)行參數(shù)與時(shí)間戳。

3. 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

建議操作員在實(shí)驗(yàn)日志中記錄：

• 樣品編號(hào)與體系類型；

• 參數(shù)組合；

• 成功率、存活率與異常情況。

十、安全操作規(guī)范

1. 操作前必須閱讀使用說(shuō)明；

2. 放電過(guò)程中嚴(yán)禁觸摸電極與 ShockPod；

3. 電擊杯樣品體積不得超過(guò)推薦上限；

4. 使用去鹽樣品，防止電?。?/span>

5. 每次放電后等待 10 秒，確認(rèn)放電完畢；

6. 實(shí)驗(yàn)區(qū)保持干燥，防止漏電；

7. 出現(xiàn)閃光、異味、異常響聲時(shí)立即斷電。

十一、常見(jiàn)錯(cuò)誤與排查

十二、維護(hù)與保養(yǎng)

1. 日常保養(yǎng)

• 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后關(guān)閉電源，拔掉插頭；

• 清潔 ShockPod 與電擊杯；

• 檢查電纜與接地是否牢固；

• 用無(wú)水乙醇擦拭機(jī)身。

2. 定期維護(hù)

• 每 3 個(gè)月校準(zhǔn)電壓與電容模塊；

• 每 6 個(gè)月清理散熱風(fēng)扇；

• 每年進(jìn)行一次全面性能檢測(cè)。

3. 電擊杯保養(yǎng)

• 不得用金屬刷清潔；

• 每次使用后立即沖洗并風(fēng)干；

• 如出現(xiàn)變色或裂紋需更換。

十三、注意事項(xiàng)總結(jié)

1. 樣品電導(dǎo)率對(duì)放電特性影響顯著；

2. 電壓、電容與時(shí)間常數(shù)必須協(xié)調(diào)；

3. 溫度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，應(yīng)適度冷卻；

4. 避免頻繁連續(xù)放電，間隔 ≥ 10 秒；

5. 校準(zhǔn)與維護(hù)必須由專業(yè)技術(shù)人員執(zhí)行。

十四、應(yīng)急處理

1. 電擊未完成：

• 檢查電壓是否達(dá)到設(shè)定值；

• 查看蓋鎖狀態(tài)。

2. 電弧或短路：

• 立即斷電；

• 清理殘留樣品并檢查電極。

3. 儀器報(bào)警：

• 讀取錯(cuò)誤代碼；

• 對(duì)照維修手冊(cè)進(jìn)行處理。

4. 人身安全：

• 若發(fā)生觸電，應(yīng)立即切斷電源并實(shí)施急救。

十五、結(jié)果評(píng)估與優(yōu)化

1. 評(píng)估指標(biāo)

• 轉(zhuǎn)化效率；

• 存活率；

• 時(shí)間常數(shù)與電壓一致性；

• 重復(fù)性（偏差 ≤ ±10%）。

2. 優(yōu)化策略

• 調(diào)整電容與電壓組合；

• 使用適合的電擊杯間距；

• 優(yōu)化細(xì)胞濃度與預(yù)冷時(shí)間；

• 控制緩沖液離子強(qiáng)度。

3. 結(jié)果穩(wěn)定性驗(yàn)證
   連續(xù) 5 次實(shí)驗(yàn)，轉(zhuǎn)化效率波動(dòng)不超過(guò) 15%，視為系統(tǒng)穩(wěn)定。

十六、長(zhǎng)期使用與存儲(chǔ)

1. 長(zhǎng)期不使用時(shí)，斷電并拔除電源線；

2. 存放環(huán)境溫度 10–35 ℃、濕度 ≤ 70%；

3. 不得放置于陽(yáng)光直射或強(qiáng)腐蝕氣體環(huán)境；

4. 電擊杯與 ShockPod 分開存放，使用防潮袋密封；

5. 定期開機(jī)自檢，防止電容老化。

十七、培訓(xùn)與操作資格

• 操作員須經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室安全培訓(xùn)；

• 熟悉設(shè)備結(jié)構(gòu)與參數(shù)調(diào)節(jié)邏輯；

• 每年至少參加一次設(shè)備維護(hù)與安全復(fù)訓(xùn)；

• 實(shí)驗(yàn)記錄需經(jīng)技術(shù)負(fù)責(zé)人審核。