伯樂電穿孔儀 165-2660 是一款高性能的基因?qū)肱c電轉(zhuǎn)化設(shè)備,用于細菌、酵母、植物原生質(zhì)體及真核細胞的電穿孔實驗。該儀器通過瞬間高壓脈沖作用于細胞膜,使膜結(jié)構(gòu)產(chǎn)生可逆性微孔,從而實現(xiàn)外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)的導(dǎo)入。
設(shè)備具備高精度的電壓控制、可調(diào)波形輸出、自動檢測與數(shù)據(jù)記錄功能,適合科研實驗室、醫(yī)藥研發(fā)機構(gòu)及教學(xué)單位使用。其操作簡便、重復(fù)性高、安全防護完善,是分子生物學(xué)實驗中常用的關(guān)鍵儀器之一。
電穿孔的基本原理是利用高壓脈沖在細胞膜上產(chǎn)生電場梯度,使細胞膜局部破裂形成可逆微孔。當(dāng)外源分子處于電場中時,在電驅(qū)動作用下進入細胞。隨后,電場移除,細胞膜自然修復(fù),外源分子留存在細胞內(nèi),實現(xiàn)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化。
伯樂電穿孔儀 165-2660 采用高壓儲能電容與高速放電開關(guān)技術(shù),通過控制放電電壓、電容容量、脈沖時間等參數(shù)實現(xiàn)不同類型的電場波形,包括指數(shù)衰減波和方波兩種主要模式。
主機負責(zé)控制電壓輸出、參數(shù)設(shè)定與能量管理。內(nèi)置微處理系統(tǒng)可進行自動檢測與數(shù)據(jù)存儲。
用于放置電擊杯并傳遞高壓脈沖信號。內(nèi)置安全閉鎖系統(tǒng),當(dāng)蓋未閉合時,儀器無法執(zhí)行放電。
用于擴展放電電容值,適合指數(shù)衰減波操作,可調(diào)整時間常數(shù)與能量釋放速率。
控制方波輸出、電阻負載與脈沖次數(shù),適用于真核細胞或多脈沖實驗。
三種規(guī)格:0.1 cm、0.2 cm 和 0.4 cm,用于不同細胞類型。杯體采用絕緣塑料,電極鍍金處理,導(dǎo)電均勻且抗腐蝕。
環(huán)境溫度保持在 20–25 ℃,濕度 ≤ 80%。
使用獨立接地插座,電源電壓為 220 V ±10%。
工作臺干燥、防震、遠離金屬導(dǎo)體與易燃物。
保證儀器后方通風(fēng)良好,不可堵塞散熱口。
檢查電源線及高壓線纜是否完好。
確認 ShockPod 蓋鎖結(jié)構(gòu)正常。
檢查電擊杯無裂紋與液體殘留。
模塊插入牢固,主機處于“OFF”狀態(tài)。
打開電源后進行自檢,屏幕顯示 “READY” 方可操作。
選取對數(shù)生長期的細胞,活性高、狀態(tài)良好。
用低離子強度緩沖液洗滌 2–3 次,去除培養(yǎng)基中的鹽分。
調(diào)整細胞濃度至 1×10?–1×10? cells/mL。
將 DNA、RNA 或質(zhì)粒溶液加入細胞懸液中,輕輕混勻。
將混合液預(yù)冷 5 分鐘,以降低電擊熱效應(yīng)。
將主機置于平穩(wěn)臺面。
插入 ShockPod 電擊槽至前端接口并鎖定。
若使用 CE 或 PC 模塊,在斷電狀態(tài)下插入后端擴展接口。
連接電源線并接地。
打開電源開關(guān),待儀器完成自檢。
設(shè)備自檢內(nèi)容包括電源穩(wěn)定性、電壓模塊功能、溫度狀態(tài)和接口檢測。若屏幕出現(xiàn)錯誤提示,應(yīng)立即斷電檢查。
開機后主界面顯示三種模式選項:
Preset Protocol(預(yù)設(shè)程序):系統(tǒng)內(nèi)置常見細胞類型參數(shù)。
Manual Setup(手動設(shè)置):用戶可自定義電壓、電容、電阻、波形等。
User Program(用戶程序):調(diào)用或保存自定義參數(shù)。
通過方向鍵選擇模式后按 “ENTER” 進入設(shè)置界面。
兩種可選波形:
指數(shù)衰減波(Exponential Decay):適用于細菌、酵母、植物原生質(zhì)體。
方波(Square Wave):適用于哺乳動物細胞及多脈沖轉(zhuǎn)染。
電壓范圍:10–3000 V。
調(diào)整步進:1 V。
常見設(shè)定:
細菌:1800–2500 V
酵母:1000–1500 V
哺乳動物細胞:300–800 V
通過上下鍵調(diào)節(jié)后按 “ENTER” 確認。
| 參數(shù) | 范圍 | 功能說明 |
|---|---|---|
| 電容 | 25–3275 μF | 決定能量儲存與衰減速度 |
| 電阻 | 50–1000 Ω 或 ∞ | 控制放電速度及波形平滑度 |
| 脈沖時間 | 0.05–10 ms | 方波持續(xù)時間,可多次疊加 |
對于多脈沖模式,可設(shè)置脈沖次數(shù)(1–10 次)及間隔時間(1–10 秒)。
設(shè)定完成后可按 “SAVE” 保存為用戶程序,系統(tǒng)自動分配編號。可隨時通過 “LOAD” 調(diào)用歷史參數(shù)。
將樣品 100–400 μL 加入電擊杯中。
檢查液面平整、無氣泡。
將電擊杯水平放入 ShockPod 電擊槽。
蓋上安全蓋,等待屏幕顯示 “Cuvette Ready”。
按 “PULSE” 鍵進入充電狀態(tài),系統(tǒng)提示 “CHARGING”。
當(dāng)提示 “READY TO PULSE” 時,按確認鍵開始放電。
放電瞬間完成,屏幕顯示電壓曲線及時間常數(shù)。
放電后等待系統(tǒng)顯示 “COMPLETE”,再取出電擊杯。
注意:放電過程中嚴禁觸碰儀器及電擊槽,以防高壓傷害。
放電完成后立即將樣品轉(zhuǎn)移至恢復(fù)培養(yǎng)基中。
細菌恢復(fù)時間約 30 分鐘,哺乳動物細胞 1–2 小時。
若液體溢出,應(yīng)及時擦拭 ShockPod 內(nèi)壁并保持干燥。
放電結(jié)束后,儀器自動生成實驗數(shù)據(jù):
輸出電壓
時間常數(shù)(τ)
樣品電阻
能量釋放百分比
數(shù)據(jù)可存儲在內(nèi)部存儲區(qū)或?qū)С鲋镣獠吭O(shè)備(USB 接口)。
建議用戶建立實驗記錄表,記錄樣品類型、參數(shù)設(shè)置及結(jié)果,以便優(yōu)化條件。
關(guān)閉電源開關(guān)并拔下電源線。
等待 10 秒,確保電容完全放電。
用無離子水沖洗電擊杯,晾干備用。
檢查 ShockPod 是否有液體殘留,用干布擦拭。
用柔軟布擦拭儀器外殼,保持清潔。
覆蓋防塵罩,放置于干燥環(huán)境中。
| 問題 | 原因分析 | 解決方法 |
|---|---|---|
| 電弧閃光 | 樣品含鹽或氣泡 | 更換緩沖液,去除氣泡 |
| 電壓無輸出 | 模塊連接松動 | 重新插緊模塊接口 |
| 屏幕無顯示 | 電源線或保險絲問題 | 檢查電源,必要時更換保險絲 |
| 樣品死亡率高 | 電壓過高或時間過長 | 降低參數(shù)重新實驗 |
| 轉(zhuǎn)化效率低 | 電壓不足或細胞狀態(tài)差 | 優(yōu)化電壓與細胞濃度 |
| 模塊識別失敗 | 接口臟污或接觸不良 | 清潔插口重新連接 |
操作人員必須經(jīng)過高壓設(shè)備使用培訓(xùn)。
禁止在潮濕或?qū)щ姳砻嫔鲜褂脙x器。
放電過程中不得打開 ShockPod 蓋。
嚴禁使用破裂或污染的電擊杯。
電源線、接地線保持良好,禁止私自更換插頭。
若出現(xiàn)異味、煙霧或異常聲響,應(yīng)立即斷電。
不得將金屬物體接觸儀器接口。
使用完畢后確認完全斷電再清潔。
溫度控制
電穿孔操作前可將樣品及電擊杯置于冰上預(yù)冷 5 分鐘,減少熱損傷。
緩沖液優(yōu)化
使用低離子強度緩沖液(如無鈣無鎂 PBS 或?qū)S?electroporation buffer)。
電壓梯度法
新細胞類型可從低電壓逐級提升,找到最佳條件。
重復(fù)性檢測
每種參數(shù)至少重復(fù) 3 次,以確保結(jié)果穩(wěn)定。
數(shù)據(jù)分析
對比轉(zhuǎn)化效率與細胞存活率,確定最佳脈沖組合。
每次使用后清潔儀器表面與電擊槽。
定期檢查風(fēng)扇運行是否正常。
每三個月進行一次電壓輸出校準(zhǔn)。
定期清理模塊接口,防止灰塵積聚。
長期不使用時每月通電 5 分鐘以保持電容活性。
電擊杯建議使用 2–3 次后更換。
伯樂電穿孔儀 165-2660 由長沙實了個驗儀器制造有限公司生產(chǎn),提供 三年質(zhì)保,只換不修 服務(wù)。
在質(zhì)保期內(nèi),如出現(xiàn)性能故障或輸出異常,可聯(lián)系廠家技術(shù)支持更換整機或模塊。
用戶不得自行拆機維修,避免失去質(zhì)保資格。
若操作過程中發(fā)生電弧閃光,應(yīng)立即停止實驗并斷電。
若液體進入設(shè)備內(nèi)部,應(yīng)拔掉插頭并用干布擦拭。
若人員觸電,應(yīng)立刻切斷電源并實施急救。
若設(shè)備冒煙或發(fā)熱異常,使用二氧化碳滅火器,不可用水。
操作結(jié)束后,應(yīng)填寫設(shè)備使用日志,記錄狀態(tài)與參數(shù)。
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