伯樂電轉(zhuǎn)儀使用說明書（通用版）

一、設(shè)備概述

伯樂（Bio-Rad）電轉(zhuǎn)儀是一種專業(yè)用于蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜的實驗設(shè)備，廣泛應(yīng)用于Western Blot實驗中，將SDS-PAGE分離的蛋白從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上（如PVDF或NC膜），為后續(xù)抗體雜交檢測做準(zhǔn)備。該儀器依靠電場作用完成蛋白遷移，可實現(xiàn)高效、清晰的蛋白條帶轉(zhuǎn)移。

伯樂電轉(zhuǎn)系統(tǒng)根據(jù)應(yīng)用場景分為多個版本，包括傳統(tǒng)濕轉(zhuǎn)系統(tǒng)（如Mini Trans-Blot? Cell）和快速轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（如Trans-Blot? Turbo?），滿足不同用戶在轉(zhuǎn)膜速度、精度、通量和操作便捷性上的需求。

二、設(shè)備組成與原理

1. 主要組件

• 主機電源模塊：設(shè)定電壓、電流和運行時間，帶有液晶顯示。

• 轉(zhuǎn)膜模塊：包括電極板、支撐夾層、轉(zhuǎn)膜卡夾、冷卻系統(tǒng)等。

• 電極接口和導(dǎo)線：紅黑兩極對應(yīng)陽極和陰極。

• 轉(zhuǎn)膜耗材：

• 聚丙烯酰胺凝膠；

• 膜（PVDF或NC）；

• 濾紙（Whatman）；

• 轉(zhuǎn)膜緩沖液。

2. 工作原理

當(dāng)電流通過轉(zhuǎn)膜夾層時，蛋白質(zhì)在電場作用下從凝膠遷移到膜上（陰極→陽極方向）。轉(zhuǎn)移過程保持蛋白構(gòu)象穩(wěn)定，且盡量避免蛋白擴散或降解。成功轉(zhuǎn)膜的關(guān)鍵是：

• 合理設(shè)置電壓、電流；

• 確保夾層結(jié)構(gòu)無氣泡；

• 緩沖液電導(dǎo)性適中、溫度控制良好。

三、轉(zhuǎn)膜操作流程（濕轉(zhuǎn)法）

第一步：轉(zhuǎn)膜前準(zhǔn)備

1. 凝膠處理：

• 電泳完成后取出凝膠，切除泳道不需要區(qū)域；

• 剪裁至合適尺寸，保留蛋白條帶區(qū)域。

2. 膜處理：

• NC膜可直接使用；

• PVDF膜需用甲醇活化1分鐘后轉(zhuǎn)入水→緩沖液中平衡；

• 剪裁大小略大于凝膠，確保完全覆蓋。

3. 緩沖液配制：

• 常用Tris-Glycine緩沖液，含20%甲醇；

• 配好后低溫保存，使用時冷卻至4°C。

4. 濾紙和墊層準(zhǔn)備：

• 濾紙和海綿墊剪裁與凝膠大小一致；

• 浸泡在冷緩沖液中至少5分鐘，充分潤濕。

第二步：夾層裝配

裝配順序如下（自下而上）：

1. 黑色電極（陰極）側(cè)：

• 海綿墊

• 濾紙

• 凝膠

• 膜（PVDF/NC）

• 濾紙

• 海綿墊

2. 每層鋪放后，用玻棒輕輕滾壓去除氣泡，尤其是凝膠-膜之間。

3. 固定夾具夾緊后插入電泳槽，保證方向正確：

• 黑色（陰極）連接凝膠面；

• 紅色（陽極）連接膜面；

• 電流方向為“黑進紅出”。

第三步：電泳轉(zhuǎn)膜參數(shù)設(shè)置

根據(jù)蛋白大小和膠厚度設(shè)置不同參數(shù)：

溫馨提示：電流不應(yīng)超過350 mA，確保緩沖液不升溫過快。

第四步：運行與轉(zhuǎn)膜后處理

1. 啟動電源，監(jiān)控電壓、電流及溫度。

2. 完成后關(guān)閉電源，取出膜并進行短暫染色（如Ponceau S）確認蛋白轉(zhuǎn)移效果。

3. 用純水沖洗去除染色劑，晾干或封閉，準(zhǔn)備后續(xù)抗體孵育步驟。

四、快速轉(zhuǎn)膜操作（Trans-Blot? Turbo?）

該型號主打5–10分鐘快速轉(zhuǎn)膜，可大幅提高效率，適合高通量或緊急實驗需求。

操作簡要流程：

1. 使用專用Turbo轉(zhuǎn)膜包（包括預(yù)制凝膠-膜夾層）；

2. 插入電轉(zhuǎn)模塊后，主機自動識別程序；

3. 啟動后自動完成電壓調(diào)節(jié)與運行；

4. 轉(zhuǎn)膜完成后立即可用于免疫檢測。

五、注意事項與技巧

1. 膜的選用

• PVDF膜：

• 機械強度高、蛋白結(jié)合能力強；

• 需甲醇預(yù)處理；

• 適合后續(xù)長期保存或剝離。

• NC膜：

• 操作簡便，價格低；

• 容易脆裂、不適合高溫剝離。

2. 防止“空帶”或條帶失真

• 膜與凝膠必須緊密貼合；

• 轉(zhuǎn)膜前去除所有氣泡；

• 緩沖液要充分預(yù)冷，防止蛋白變性。

3. 提高轉(zhuǎn)膜效率技巧

• 可將膜朝電場方向略傾斜放置，促進定向遷移；

• 對大分子蛋白使用SDS加入轉(zhuǎn)膜緩沖液，增強釋放；

• 多重轉(zhuǎn)膜實驗需更換新膜避免污染。

六、常見問題與排查

七、設(shè)備維護與保養(yǎng)

• 使用后及時清洗電泳槽和電極板；

• 定期擦拭主機外殼，保持通風(fēng)干燥；

• 存儲時將電源線和電極線松弛收好；

• 若長期不使用，應(yīng)斷電保存，防止電容老化。

八、實驗拓展應(yīng)用

1. 雙向轉(zhuǎn)膜

將膜分段與兩個凝膠結(jié)合，用于同批樣本不同抗體染色，提高效率。

2. 條帶對齊識別

轉(zhuǎn)膜后預(yù)染蛋白或Ponceau S染色可提前判斷條帶對應(yīng)泳道，減少后期誤識。

3. 定量蛋白轉(zhuǎn)膜

利用蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線與膜圖像系統(tǒng)聯(lián)用，實現(xiàn)半定量分析。

九、總結(jié)

伯樂電轉(zhuǎn)儀以其精密性、兼容性與高穩(wěn)定性在蛋白轉(zhuǎn)膜實驗中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。通過標(biāo)準(zhǔn)操作流程、合理參數(shù)設(shè)置與細致日常維護，實驗人員可以獲得高質(zhì)量、重復(fù)性強的轉(zhuǎn)膜結(jié)果。