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質(zhì)保3年只換不修，廠家長(zhǎng)沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司

一、設(shè)備概述

伯樂(lè)（Bio-Rad）電穿孔儀165-2660是一款高精度、智能化的電轉(zhuǎn)化設(shè)備，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞工程及基因編輯領(lǐng)域。該設(shè)備以高能脈沖電場(chǎng)為核心技術(shù)，通過(guò)瞬時(shí)放電在細(xì)胞膜上形成可逆性微孔，使外源DNA、RNA或蛋白分子能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，從而實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染。其設(shè)計(jì)兼顧實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性與操作靈活性，能夠滿足不同類型細(xì)胞的電穿孔需求，包括細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞以及植物原生質(zhì)體。

165-2660電穿孔儀采用先進(jìn)的數(shù)字化控制系統(tǒng)，具有自動(dòng)檢測(cè)電阻、電容及脈沖輸出的功能。設(shè)備具備多種模式可選，可進(jìn)行時(shí)間常數(shù)模式與方波脈沖模式切換，以適配不同實(shí)驗(yàn)體系。其可靠的硬件結(jié)構(gòu)與精密的能量輸出控制，為實(shí)驗(yàn)重復(fù)性和細(xì)胞存活率提供了技術(shù)保障。

二、核心技術(shù)特點(diǎn)

1. 精確的脈沖控制系統(tǒng)
   設(shè)備采用高性能微處理芯片，可實(shí)時(shí)監(jiān)控電壓、電流及時(shí)間常數(shù)。電場(chǎng)強(qiáng)度可在0.2 kV至2.5 kV范圍內(nèi)連續(xù)調(diào)節(jié)，滿足從原核生物到真核細(xì)胞的不同需求。

2. 寬范圍參數(shù)調(diào)節(jié)
   電容值可在25 μF至3300 μF之間設(shè)定，電阻可根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求自動(dòng)匹配，從而獲得理想的時(shí)間常數(shù)（通常在4–6 ms范圍）。這種可調(diào)節(jié)設(shè)計(jì)極大地提高了實(shí)驗(yàn)靈活性。

3. 高安全性與重復(fù)性
   儀器具備過(guò)壓保護(hù)與自動(dòng)放電系統(tǒng)，可在操作結(jié)束后迅速釋放殘余電荷，防止誤觸電擊。輸出波形穩(wěn)定，重復(fù)誤差小于1%，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性。

4. 人性化操作界面
   前面板設(shè)計(jì)簡(jiǎn)潔，配有高亮液晶顯示屏，可清晰顯示設(shè)定電壓、時(shí)間常數(shù)、脈沖次數(shù)及輸出曲線。旋鈕式參數(shù)調(diào)節(jié)與數(shù)字化輸入結(jié)合，操作直觀且響應(yīng)迅速。

5. 兼容多種電穿孔杯
   設(shè)備支持0.1 cm、0.2 cm及0.4 cm間隙的電轉(zhuǎn)杯，適應(yīng)不同細(xì)胞類型的轉(zhuǎn)化體積與電場(chǎng)強(qiáng)度需求。

三、參數(shù)設(shè)置原理

電穿孔的核心是電場(chǎng)強(qiáng)度（E）、脈沖時(shí)間（t）與細(xì)胞類型三者的匹配。一般公式為：
E=VdE = \frac{V}6cwwew00wukwE=dV
其中V為設(shè)定電壓，d為電轉(zhuǎn)杯間隙。不同細(xì)胞對(duì)電場(chǎng)強(qiáng)度敏感性不同，因此合理設(shè)定參數(shù)是成功轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵。

1. 電壓設(shè)定
   對(duì)于大腸桿菌等細(xì)菌，推薦設(shè)定電壓為1.8–2.5 kV；
   對(duì)于酵母，通常使用0.8–1.5 kV；
   對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如CHO、HEK293等，則建議電壓控制在0.25–0.8 kV范圍。

2. 電容與時(shí)間常數(shù)
   時(shí)間常數(shù)τ由電容C與電阻R共同決定：
   τ=R×C\tau = R \times Cτ=R×C
   一般來(lái)說(shuō)，細(xì)菌電轉(zhuǎn)的理想時(shí)間常數(shù)為4–5 ms，真核細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)至8–10 ms。165-2660內(nèi)置自動(dòng)時(shí)間常數(shù)測(cè)量功能，可在放電完成后自動(dòng)顯示τ值，方便優(yōu)化。

3. 脈沖次數(shù)與間隔
   設(shè)備可設(shè)定單脈沖或多脈沖輸出。單脈沖模式用于標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，多脈沖模式適用于需要更高DNA攝取率的哺乳細(xì)胞。脈沖間隔可在50–500 ms內(nèi)調(diào)節(jié)，以防止過(guò)熱損傷。

四、常用參數(shù)設(shè)置實(shí)例

1. 大腸桿菌轉(zhuǎn)化

• 電轉(zhuǎn)杯：0.2 cm

• 電壓：2.5 kV

• 電容：25 μF

• 電阻：200 Ω

• 時(shí)間常數(shù)：約5 ms

• 結(jié)果：轉(zhuǎn)化效率高，細(xì)胞存活率良好。

2. 酵母電穿孔

• 電轉(zhuǎn)杯：0.2 cm

• 電壓：1.2 kV

• 電容：50 μF

• 時(shí)間常數(shù)：約7 ms

• 需在預(yù)冷條件下進(jìn)行，防止熱損傷。

3. 哺乳動(dòng)物細(xì)胞轉(zhuǎn)染

• 電轉(zhuǎn)杯：0.4 cm

• 電壓：0.45 kV

• 電容：250 μF

• 脈沖數(shù)：2

• 間隔：100 ms

• 建議在無(wú)血清緩沖液中操作，以提高穿孔效率。

4. 植物原生質(zhì)體電穿孔

• 電轉(zhuǎn)杯：0.4 cm

• 電壓：0.8 kV

• 電容：1000 μF

• 時(shí)間常數(shù)：約10 ms

• 實(shí)驗(yàn)后需立即在滲透平衡液中復(fù)蘇。

五、操作步驟詳解

1. 設(shè)備準(zhǔn)備
   將電穿孔儀165-2660接入穩(wěn)定電源，檢查電纜與轉(zhuǎn)杯連接是否牢固。確保儀器處于待機(jī)狀態(tài)。

2. 細(xì)胞樣品準(zhǔn)備
   采用無(wú)鹽緩沖液洗滌細(xì)胞，去除導(dǎo)電離子，避免放電時(shí)產(chǎn)生電弧。DNA或質(zhì)粒樣品應(yīng)純度高，無(wú)雜質(zhì)。

3. 裝樣與電轉(zhuǎn)
   將樣品與DNA混勻后加入電轉(zhuǎn)杯，輕輕敲擊使液體均勻分布。插入轉(zhuǎn)杯槽位，蓋緊安全蓋。根據(jù)預(yù)設(shè)程序啟動(dòng)脈沖。

4. 放電與顯示
   放電后屏幕將自動(dòng)顯示實(shí)際電壓、電流及時(shí)間常數(shù)。記錄數(shù)據(jù)以便分析。

5. 復(fù)蘇與培養(yǎng)
   放電完成后立即將樣品轉(zhuǎn)入適當(dāng)復(fù)蘇培養(yǎng)基中，靜置或輕搖數(shù)分鐘后按實(shí)驗(yàn)要求培養(yǎng)。

六、數(shù)據(jù)記錄與優(yōu)化策略

實(shí)驗(yàn)者應(yīng)記錄每次轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵參數(shù)，包括電壓、電容、時(shí)間常數(shù)、樣品體積及轉(zhuǎn)化效率。通過(guò)比較不同參數(shù)組合的結(jié)果，可逐步優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。
若出現(xiàn)電弧放電，可適當(dāng)降低電壓或更換緩沖液；若轉(zhuǎn)化效率偏低，可延長(zhǎng)時(shí)間常數(shù)或增加脈沖次數(shù)。

七、維護(hù)與保養(yǎng)

1. 日常清潔
   使用后應(yīng)立即取出轉(zhuǎn)杯，用無(wú)離子水清洗并晾干，防止鹽分殘留。儀器外殼可用柔軟布輕拭，避免使用有機(jī)溶劑。

2. 電極檢查
   定期檢查電極表面是否有腐蝕或燒蝕痕跡。若發(fā)現(xiàn)損傷，應(yīng)及時(shí)更換以防影響電場(chǎng)均勻性。

3. 軟件與校準(zhǔn)
   每隔6個(gè)月應(yīng)進(jìn)行一次校準(zhǔn)測(cè)試，確保電壓輸出準(zhǔn)確。Bio-Rad官方提供校準(zhǔn)工具包與軟件升級(jí)包，可通過(guò)USB接口更新。

4. 儲(chǔ)存條件
   儀器應(yīng)放置于干燥、無(wú)塵環(huán)境，避免陽(yáng)光直射與高溫。長(zhǎng)期不用時(shí)，應(yīng)斷開電源并覆蓋防塵罩。

八、安全注意事項(xiàng)

• 放電前務(wù)必確認(rèn)安全蓋關(guān)閉；

• 禁止在帶電狀態(tài)下更換轉(zhuǎn)杯；

• 實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)佩戴防護(hù)手套與護(hù)目鏡；

• 遇到異常聲響或過(guò)熱，應(yīng)立即斷電檢查。

設(shè)備具有自動(dòng)放電保護(hù)系統(tǒng)，但仍應(yīng)保持警覺(jué)，防止高壓殘留造成安全隱患。

九、應(yīng)用前景與優(yōu)勢(shì)分析

伯樂(lè)電穿孔儀165-2660憑借其高精度控制、操作簡(jiǎn)便與穩(wěn)定輸出，被廣泛應(yīng)用于基因編輯、疫苗研發(fā)、抗體篩選及細(xì)胞治療研究中。相比化學(xué)轉(zhuǎn)化和脂質(zhì)轉(zhuǎn)染方法，電穿孔的優(yōu)勢(shì)在于不依賴載體體系，能夠適用于多種細(xì)胞類型，并且轉(zhuǎn)化效率高、背景干擾小。
在CRISPR/Cas9系統(tǒng)中，該設(shè)備可實(shí)現(xiàn)質(zhì)粒、mRNA及RNP復(fù)合物的高效導(dǎo)入，是精準(zhǔn)基因操作的重要工具。