質(zhì)保3年只換不修,廠家長沙實了個驗儀器制造有限公司。
一、概述與適用對象
伯樂電穿孔1652100是一款面向微生物與基礎分子克隆實驗的臺式電穿孔設備,特點是結(jié)構(gòu)緊湊、操作簡潔、參數(shù)調(diào)用迅速、重復性好。更適合細菌與酵母等微生物的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、線性DNA導入、標記染料或小分子進入等場景。本文提供一份從準備到收尾的完整操作步驟與配套表格建議,幫助新手快速掌握、老手穩(wěn)定發(fā)揮。
二、上機前準備(環(huán)境與物料)
實驗環(huán)境
臺面干燥、整潔,遠離明水與強腐蝕性試劑。
佩戴護目鏡、絕緣手套、實驗服。
預留穩(wěn)定電源插座,避免與大功率設備共插一排造成電壓波動。
設備與耗材
1652100主機、電極連接線、電擊杯架。
電穿孔比色杯(0.1 cm與0.2 cm常用,原裝或同規(guī)格兼容一次性杯)。
細胞電穿孔緩沖液(低離子強度),無菌離心管。
質(zhì)?;蚓€性DNA/環(huán)狀DNA、RNA或其他待導入分子。
復蘇培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿或選擇性平板。
溫控與預處理
比色杯置冰上或4℃冷藏預冷30分鐘以上。
緩沖液與細胞懸液同溫,減少溫差應激。
復蘇培養(yǎng)基預溫至適宜溫度(如37℃)。
三、樣本制備(細胞與核酸)
細胞狀態(tài)
細菌或酵母處于對數(shù)生長期,活力高,細胞壁/膜完整。
充分去除高鹽培養(yǎng)基:離心收集后以去離子水或低離子電穿孔緩沖液洗滌2–3次。
細胞濃度
細菌:常見范圍約1×10? cells/mL;酵母可略低。根據(jù)經(jīng)驗與后續(xù)轉(zhuǎn)化效率微調(diào)。
核酸樣品
質(zhì)粒純度高、無鹽離子殘留、無內(nèi)毒素干擾;濃度與總量按菌株經(jīng)驗值配置。
混合前輕柔操作,避免劇烈吹打產(chǎn)生氣泡。
四、裝杯與體積建議
選擇杯隙
0.1 cm杯:電場強,常用于細菌小體積高效率轉(zhuǎn)化。
0.2 cm杯:電場較緩,適合對電擊較敏感的微生物或需要稍大體積的樣本。
上樣體積
0.1 cm杯建議40–60 μL;0.2 cm杯建議50–100 μL。保持液面平整,避免氣泡。
操作要點
預冷后的杯體從冰上取下,迅速加入細胞與核酸混合液,輕彈底部排泡。
擦拭杯外壁,確保干燥再插入杯槽,防止表面導電造成電弧。
五、設備開機與自檢
接通電源并開機,觀察屏幕與指示燈是否正常。
檢查電極線連接穩(wěn)固、杯架清潔、杯槽內(nèi)無異物與水漬。
空載自檢:無需插杯,執(zhí)行待機檢測,確認主機無報警信息。
六、程序選擇與參數(shù)設定
預設程序
1652100為微生物優(yōu)化過的預設檔,適合大腸桿菌、酵母等常見對象。選擇對應程序可快速獲得可重復結(jié)果。
手動參數(shù)
需要微調(diào)時,可根據(jù)菌株、杯隙、緩沖與體積調(diào)整電壓與脈沖時間常數(shù)目標區(qū)間。
原則:新菌株先保守,優(yōu)先保障存活率,再逐步提高電場強度。
記錄表
在操作前于記錄表寫明:日期、菌株/細胞、杯隙、體積、核酸量、所用程序或參數(shù)、操作者簽名。
七、施加脈沖的標準步驟
插杯
將裝有樣本的電擊杯沿正確方向插入杯槽,壓緊就位。確保杯壁干燥、無液體外溢。
安全確認
蓋好防護蓋或放下杯架護罩,確認周圍人員知悉將施加高壓。
觸發(fā)脈沖
按下觸發(fā)鍵。過程中不要觸碰杯體與電極。
讀取反饋
脈沖結(jié)束后,屏幕會顯示關鍵反饋值(如電壓讀數(shù)、時間常數(shù))。及時記錄。
取杯轉(zhuǎn)移
迅速取出杯體,用無菌移液器將樣本移入復蘇培養(yǎng)基或目標體系。對細菌,可立即37℃振蕩復蘇;對酵母,按相應條件溫育。
八、脈沖后處理與復蘇
細菌樣本
通常復蘇30–60分鐘后涂布對應抗性平板,倒置培養(yǎng)。
酵母樣本
復蘇時間可適當延長,視菌株耐受情況而定。
注意事項
復蘇期間輕柔混勻,避免剪切損傷。
需要時設置空白對照與化學法對照,用于評估電穿孔優(yōu)勢與背景。
九、培養(yǎng)、計數(shù)與效率評估
平板培養(yǎng)
選擇性培養(yǎng)基、適宜溫度與時間。
計數(shù)與記錄
統(tǒng)計菌落數(shù)或篩到的陽性克隆數(shù),記錄至操作表。
計算與比較
換算轉(zhuǎn)化效率并與以往參數(shù)、不同杯隙、不同體積進行縱向?qū)Ρ?,形成實驗室自有?jīng)驗曲線。
十、安全要點與風險控制
防電弧
杯外壁干燥、無鹽液殘留、無氣泡。
體積不過量,避免液面上翻觸及杯蓋內(nèi)壁。
防觸電
施加脈沖時手離開杯體與電極,嚴禁開啟保護罩。
防過熱
連續(xù)多次脈沖需間隔,讓設備電容與電源模塊散熱,延長壽命。
生物安全
對轉(zhuǎn)化物、質(zhì)粒與菌株進行合規(guī)標識與分類管理,廢棄物按規(guī)程處置。
十一、常見問題與快速排查
電弧或報警
可能因杯外壁潮濕、樣本導電性過強、杯內(nèi)有氣泡。解決:擦干杯體、更換低離子緩沖、重新上樣排泡、適度減少體積。
轉(zhuǎn)化效率低
可能因細胞狀態(tài)差、DNA純度不足、參數(shù)偏保守或過激。解決:用對數(shù)期細胞、提升DNA質(zhì)量、逐步優(yōu)化電壓與杯隙、縮短或微調(diào)脈沖目標。
無菌落或全部陰性
排查選擇性壓力是否過強、平板是否失效、復蘇是否充分、DNA是否降解。
屏幕無顯示或鍵無響應
檢查電源、保險絲與連接線;斷電靜置后重啟。若重復出現(xiàn),停止使用并聯(lián)系售后更換。
時間常數(shù)異常飄忽
多與導電性、杯隙與體積有關,重新制備樣本,記錄對照以確認問題在樣本或耗材而非設備。
十二、參數(shù)優(yōu)化的實務路徑
單變量法
在固定菌株與緩沖條件下,僅改變電壓或杯隙,觀察效率與存活率變化。
體積與濃度
同步考察樣本體積與細胞密度,對電場均勻性與熱效應影響顯著。
復蘇條件
不同菌株對復蘇時間與溫度敏感度不同,設置2–3檔并行評估。
統(tǒng)計與沉淀
連續(xù)3–5批次取均值,更能反映參數(shù)真趨勢。把“好用”的參數(shù)固化為實驗室SOP版本號,便于新成員直接采用。
十三、維護保養(yǎng)與周期檢查
日常清潔
斷電狀態(tài)下,用70%酒精擦拭外殼與杯槽表面,嚴禁強溶劑。
電極與杯槽
定期觀察有無氧化、積塵或液體滲漏痕跡,若有異常立即停機處理。
散熱與間歇
高頻使用安排合理間隔,避免過熱。
記錄與追蹤
建立設備臺賬:使用日期、累計次數(shù)、異常事件、維護時間節(jié)點。
校核建議
每月進行一次輸出一致性核查(對比歷史反饋值),每季度做一次全面狀態(tài)巡檢。
十四、規(guī)范化文檔與可追溯管理
標準操作卡(建議貼在設備旁)
準備清單 → 安全檢查 → 選杯裝樣 → 設定程序 → 脈沖 → 復蘇 → 培養(yǎng) → 記錄。
記錄表核心字段
日期、操作者、菌株/細胞、杯隙與體積、緩沖類型、DNA信息、程序/參數(shù)、脈沖反饋值、復蘇與培養(yǎng)條件、結(jié)果與備注。
版本管理
SOP標注版本號與生效日期,變更要點以“修訂記錄”形式留痕。
十五、完整操作示例(范式)
準備階段
預冷0.1 cm杯與緩沖液,離心收集對數(shù)期細胞并低離子洗滌,調(diào)至目標濃度。
配好高純度質(zhì)粒,核酸總量按經(jīng)驗范圍配置。
裝杯
取40–60 μL細胞核酸混合液入預冷杯,輕彈排泡,擦干外壁。
設定
選擇對應該菌株的預設程序;首次嘗試使用保守檔位。
脈沖
插杯、合上護罩,觸發(fā)脈沖;記錄反饋值。
轉(zhuǎn)移與復蘇
立即轉(zhuǎn)入預溫復蘇液,輕柔混勻,振蕩培養(yǎng)至30–60分鐘。
上板與培養(yǎng)
涂布選擇平板或接種液體培養(yǎng),標記清楚,按溫度與時間培養(yǎng)。
評估
計數(shù)菌落或檢測陽性克隆,計算效率,填寫記錄表,與歷史參數(shù)比對。
收尾
斷電、清潔、歸還耗材,更新臺賬與SOP優(yōu)化建議。
十六、質(zhì)量與結(jié)果提升的關鍵細節(jié)
核酸純度與緩沖離子強度是效率與電弧發(fā)生的決定因素。
杯隙與體積影響電場強度與均勻性,先從小體積與較小杯隙切入更穩(wěn)妥。
冰上操作減少熱損傷,但復蘇應迅速過渡到最適溫度。
通過空白對照、化學法對照建立參照坐標,客觀評估電穿孔收益。
定期回顧“失敗樣本”并歸因,形成內(nèi)部FAQ庫。
十七、設備故障處理與質(zhì)保對接
若遇到無法自排的故障(反復報警、無顯示、反饋值異常且與樣本無關),立即停止使用,拍照留存界面信息與操作環(huán)境,記錄日期與批次。
在質(zhì)保期內(nèi)按“只換不修”的方式對接更換,保留發(fā)票、序列號、問題描述與排查步驟。
更換后進行一次基線測試,確認新設備輸出一致、反饋穩(wěn)定,再恢復常規(guī)實驗。
十八、結(jié)語
1652100在微生物電轉(zhuǎn)化中的優(yōu)勢體現(xiàn)在操作友好、參數(shù)可復制、效率提升、維護輕量。遵循以上操作步驟與記錄規(guī)范,能顯著降低新手學習曲線,提升批次穩(wěn)定性與成功率。把安全與質(zhì)量控制前移,把優(yōu)化與復盤固化為SOP的日常部分,實驗室即可建立起可靠的電穿孔工作流,在保障人員與設備安全的前提下,持續(xù)輸出穩(wěn)定、可驗證的結(jié)果。
杭州實了個驗生物科技有限公司