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在 ELISA 實驗及其他基于微孔板的檢測中，洗滌步驟對實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性具有決定性作用。賽默飛 Wellwash 1x12 洗板機通過自動化操作提升了洗滌效率和一致性，而正確使用清洗試劑則是保障實驗成功的關(guān)鍵。不同類型的試劑在洗板過程中承擔(dān)著去除未結(jié)合物、降低背景、保持目標(biāo)分子穩(wěn)定的作用。因此，實驗人員必須系統(tǒng)掌握試劑的選擇、配制與使用方法，才能在實際應(yīng)用中得到最佳效果。
PBS（磷酸鹽緩沖鹽溶液）：最常用的基礎(chǔ)清洗液，維持孔內(nèi)離子強度和 pH 穩(wěn)定。
TBS（Tris 緩沖鹽溶液）：在部分實驗中可替代 PBS，適合對磷酸敏感的體系。
PBS-T 或 TBS-T（含 Tween-20）：常見濃度為 0.05% Tween-20，可減少非特異性結(jié)合，提高洗滌徹底性。
對于背景較高的體系，可以適度提高至 0.1%，但需避免損傷結(jié)合物。
低濃度 Triton X-100 或 NP-40：用于細(xì)胞相關(guān)實驗，幫助去除細(xì)胞碎片。
乙醇或甲醇稀釋液：在特殊檢測中用于去除疏水性物質(zhì)，但不常規(guī)使用。
用于管路沖洗和終末清潔，避免殘留鹽分結(jié)晶。
PBS 配方：NaCl、KCl、Na2HPO4、KH2PO4，pH 7.2-7.4。
TBS 配方：Tris、NaCl，pH 7.4-8.0。
Tween-20 應(yīng)先用少量緩沖液稀釋再加入母液，避免直接倒入引起漂浮泡沫。
建議現(xiàn)配現(xiàn)用，如需長期存放，應(yīng)低溫保存，避免微生物污染。
對于敏感實驗，配制完成后可通過 0.22 μm 濾膜過濾，去除顆粒和微生物。
并非所有實驗都需滅菌，但至少保證試劑無可見懸浮物。
確認(rèn)試劑透明無沉淀，若發(fā)現(xiàn)結(jié)晶，應(yīng)重新配制。
檢查 pH 是否符合要求，不合適的緩沖液可能影響抗原抗體結(jié)合。
清洗瓶應(yīng)清潔干凈，避免殘留舊液。
裝液量應(yīng)根據(jù)實驗數(shù)量計算，避免過多浪費。
新?lián)Q試劑后應(yīng)運行“Prime”或排氣程序，讓試劑充滿管路，避免空氣泡干擾噴液。
可先用去離子水沖洗一遍，再換成新配試劑。
進液速度：中等速度可兼顧洗滌徹底性與避免劇烈沖擊。
浸泡時間：對于高背景實驗，浸泡 30-60 秒可增強去除效果。
清洗次數(shù)：ELISA 常設(shè)為 3-5 次；若孔內(nèi)殘液多，可適度增加。
細(xì)胞相關(guān)實驗應(yīng)避免使用表面活性劑過高的洗液，以免破壞細(xì)胞層。
對于蛋白敏感實驗，可用 PBS 替代含 Tween 的緩沖液，降低干擾。
洗滌廢液中可能含有生物樣品或化學(xué)物質(zhì)，必須收集至廢液瓶中，統(tǒng)一處理。
不可隨意傾倒至下水道，應(yīng)根據(jù)實驗室生物安全規(guī)范分類處理。
配制和傾倒試劑時應(yīng)佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚或眼睛。
若不慎接觸，應(yīng)立即用大量清水沖洗。
檢查試劑是否含有氣泡，重新排氣。
檢查液體粘度是否過高，若必要可適度稀釋。
試劑未過濾可能帶入顆粒，應(yīng)定期用去離子水沖洗管路。
若堵塞嚴(yán)重，可拆下針頭進行清潔。
檢查吸液針高度設(shè)置，必要時校準(zhǔn)。
增加吸液延時，確保液滴完全被吸出。
試劑濃度不當(dāng)或洗滌不徹底，需調(diào)整 Tween-20 濃度或增加清洗次數(shù)。
檢查試劑是否受污染，必要時重新配制。
ELISA 常規(guī)選擇 PBS-T；若背景高，可改用 TBS-T。
針對某些特殊抗體，需根據(jù)說明書指定緩沖液。
Tween-20 過低洗不凈，過高可能破壞結(jié)合，建議逐步優(yōu)化。
可在預(yù)實驗中設(shè)置不同濃度梯度，比較信號強弱和背景水平。
長期大量實驗建議集中配制母液，按需稀釋使用，保證一致性。
建立配制與使用記錄，便于追蹤異常結(jié)果原因。
實驗結(jié)束后用去離子水沖洗管路，避免試劑殘留結(jié)晶。
廢液瓶清洗干凈，防止細(xì)菌滋生。
每周至少一次用 70% 酒精清洗管路，防止生物污染。
每月檢查過濾裝置，避免試劑雜質(zhì)進入。
長時間停機時，應(yīng)排空所有試劑，用去離子水沖洗干凈。
最后注入少量無害保存液，防止管路干裂。
ELISA 背景過高：將 PBS-T 調(diào)整為 TBS-T 并延長浸泡時間，背景下降明顯。
細(xì)胞洗板損傷嚴(yán)重：將含 Tween-20 的洗液換為 PBS，降低沖刷強度，細(xì)胞層保持完整。
管路結(jié)晶堵塞：發(fā)現(xiàn)是因 PBS 蒸發(fā)后鹽析，改用去離子水沖洗收尾，堵塞問題明顯減少。
批量實驗效率提升：提前配好工作液，集中清洗多板，減少試劑更換次數(shù)，提高效率。
賽默飛 Wellwash 1x12 洗板機的高效運行不僅依賴于機械性能，更取決于試劑的科學(xué)使用。掌握試劑的選擇、配制、濃度調(diào)整和日常維護方法，可以顯著提升實驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。通過合理規(guī)劃洗滌方案、科學(xué)處理廢液、結(jié)合設(shè)備保養(yǎng)，實驗人員能夠在 ELISA 和其他檢測工作中獲得穩(wěn)定可靠的結(jié)果。
