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檢查儀器外殼有無破損，內(nèi)部部件是否安裝牢固；
確認(rèn)毛細(xì)管陣列已正確安裝，無翹曲、折斷、連接松動(dòng)；
檢查電源接口、數(shù)據(jù)線連接是否穩(wěn)固，配件是否齊全（聚合物袋、緩沖瓶、樣本盤等）；
儀器內(nèi)部溫控模塊、激光系統(tǒng)、電源模塊需無異常提示。
啟動(dòng)Data Collection軟件，檢查界面是否能識(shí)別毛細(xì)管陣列編號(hào)；
檢查軟件是否能正確識(shí)別溫度、電壓、毛細(xì)管狀態(tài)等；
測試樣本板加載與彈出動(dòng)作是否靈敏；
檢查樣本板掃描功能是否準(zhǔn)確定位孔位；
確認(rèn)各項(xiàng)運(yùn)行日志、報(bào)警日志是否能正常導(dǎo)出。
激光燈源啟動(dòng)后是否正常穩(wěn)定；
查看檢測通道（FAM、VIC、NED、PET、LIZ等）是否可被識(shí)別；
進(jìn)行一次無樣本運(yùn)行，確認(rèn)激發(fā)系統(tǒng)無光路偏差。
使用推薦的測試標(biāo)準(zhǔn)，如Thermo Fisher提供的定量DNA Ladder或多重PCR產(chǎn)物；
準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)樣本，進(jìn)行實(shí)際電泳運(yùn)行；
檢查毛細(xì)管分離能力是否良好，片段峰形是否清晰、對(duì)稱；
判斷峰位對(duì)應(yīng)的片段長度是否與理論標(biāo)準(zhǔn)一致，偏差應(yīng)在±1bp范圍內(nèi)。
啟動(dòng)聚合物加載程序，檢測聚合物是否順利注入毛細(xì)管；
檢查聚合物流速、壓力是否穩(wěn)定，避免出現(xiàn)聚合物殘留或氣泡阻塞；
對(duì)比聚合物粘度設(shè)定值與實(shí)際運(yùn)行表現(xiàn)，確保參數(shù)一致。
設(shè)置不同的進(jìn)樣電壓（1.2–1.6 kV）和時(shí)間（10–20秒）進(jìn)行測試；
檢測是否存在因進(jìn)樣不均造成的峰形異常；
調(diào)整進(jìn)樣時(shí)間可評(píng)估系統(tǒng)靈敏度與重復(fù)性。
選擇1~3個(gè)已知STR類型的樣本，每個(gè)樣本平行分裝為3份；
采用完全相同的反應(yīng)體系和電泳設(shè)置進(jìn)行分析；
比較每次運(yùn)行所得電泳圖譜中各條峰的位置、峰高、峰面積；
峰位偏差控制在±0.5bp以內(nèi)，峰高CV值不高于15%，否則需檢查系統(tǒng)穩(wěn)定性。
使用微衛(wèi)星或多重PCR產(chǎn)物，測試200–400 bp范圍的片段；
在峰間距為1~2 bp時(shí)是否能完全區(qū)分不同片段；
評(píng)估儀器在復(fù)雜樣本背景下的分辨性能。
ROX 500或600標(biāo)準(zhǔn)品作為片段校準(zhǔn)基準(zhǔn)；
比對(duì)每一運(yùn)行中標(biāo)準(zhǔn)峰的實(shí)際大小與預(yù)設(shè)值；
偏差應(yīng)不超過±0.3 bp，大小標(biāo)準(zhǔn)的校準(zhǔn)擬合曲線應(yīng)平滑、連續(xù)。
取梯度稀釋的DNA模板（例如10 ng、1 ng、0.1 ng、0.05 ng）進(jìn)行PCR；
每種濃度電泳測試，觀察峰值高度、是否出現(xiàn)丟峰現(xiàn)象；
記錄最低檢測濃度下仍能識(shí)別所有片段的靈敏度；
正常儀器靈敏度應(yīng)達(dá)到0.05~0.1 ng/μL。
使用多重?zé)晒鈽?biāo)記PCR產(chǎn)物，如DS-33染料集；
檢查FAM、VIC、NED、PET等通道信號(hào)是否均衡；
若某一通道信號(hào)顯著偏低，應(yīng)檢查光學(xué)系統(tǒng)清潔情況或激光路徑校準(zhǔn)。
準(zhǔn)備PCR空白反應(yīng)液（不含DNA模板），上樣電泳；
檢查是否出現(xiàn)無源背景峰或污染峰；
空白樣本中如出現(xiàn)明顯熒光信號(hào)，應(yīng)懷疑系統(tǒng)存在交叉污染或聚合物殘留。
在兩個(gè)不同STR譜型樣本之間插入純水或空白孔；
如在空白孔中檢測到與相鄰樣本一致的峰值，則說明存在拖尾污染；
建議更換進(jìn)樣針或清洗樣本加載模塊。
軟件中觀察未上樣孔的基線圖譜；
背景應(yīng)低于100 RFU，如超過此值，考慮光路干擾或緩沖液污染。
安排樣本在不同時(shí)間段、連續(xù)運(yùn)行12小時(shí)以上；
記錄每次運(yùn)行的峰位、峰高、進(jìn)樣狀態(tài)、電壓波動(dòng)等參數(shù)；
觀察是否出現(xiàn)信號(hào)衰減、毛細(xì)管堵塞或聚合物流動(dòng)異常等現(xiàn)象。
記錄POP-7在多次運(yùn)行后信號(hào)一致性變化；
分析是否隨著使用次數(shù)增加出現(xiàn)聚合物降解現(xiàn)象；
設(shè)定聚合物有效使用周期（如100次或14天）并進(jìn)行更換提示驗(yàn)證。
啟動(dòng)GeneMapper或GeneMarker軟件，導(dǎo)入.fsa原始文件；
測試軟件的自動(dòng)峰識(shí)別、校準(zhǔn)、片段命名功能；
檢查結(jié)果圖譜、峰面積計(jì)算是否準(zhǔn)確；
檢查結(jié)果輸出格式（Excel、PDF等）是否支持實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)；
測試是否能將分析結(jié)果上傳至實(shí)驗(yàn)室信息管理系統(tǒng)（LIMS）；
驗(yàn)證分析模板是否能定制以適配不同實(shí)驗(yàn)需求。
設(shè)備到貨后，廠家通常提供一套驗(yàn)收測試項(xiàng)目。以下是推薦驗(yàn)收測試核心指標(biāo)：
| 測試項(xiàng)目 | 評(píng)估指標(biāo) | 合格標(biāo)準(zhǔn) |
|---|---|---|
| 毛細(xì)管通道檢查 | 所有通道信號(hào)正常，無堵塞 | 8通道/24通道均可工作 |
| 信號(hào)強(qiáng)度 | 所有熒光通道均能檢測到標(biāo)準(zhǔn)信號(hào) | 信號(hào)峰值 ≥1500 RFU |
| 大小標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)精度 | 每個(gè)峰定位與標(biāo)準(zhǔn)差距 ≤0.3 bp | R2 > 0.99 擬合優(yōu)良 |
| 片段分辨能力 | 2 bp 間距能清晰區(qū)分 | 峰形不拖尾、無疊加 |
| 樣本一致性 | 重復(fù)樣本CV值 ≤15% | 峰位差 ≤0.5 bp |
| 空白污染檢查 | 空白孔無有效信號(hào) | 全部背景 <100 RFU |
| 問題現(xiàn)象 | 可能原因 | 解決方案 |
|---|---|---|
| 電泳信號(hào)消失或很低 | 樣本降解、毛細(xì)管堵塞、聚合物干涸 | 更換樣本、沖洗陣列、更換聚合物 |
| 信號(hào)過強(qiáng)峰頂截?cái)?/td> | 上樣濃度過高、進(jìn)樣時(shí)間過長 | 稀釋PCR產(chǎn)物、縮短進(jìn)樣時(shí)間 |
| ROX標(biāo)準(zhǔn)峰漂移 | 熱變性不足、模板變性不徹底 | 重新熱變性處理樣本 |
| 進(jìn)樣順序錯(cuò)亂 | 樣本板未校準(zhǔn)、軟件設(shè)置錯(cuò)誤 | 重新加載樣本板并核對(duì)樣本表 |
| 軟件不識(shí)別激光系統(tǒng) | 激光未啟動(dòng)或線路故障 | 檢查連接、聯(lián)系廠家技術(shù)人員支持 |
賽默飛3500基因分析儀是一臺(tái)性能優(yōu)異的DNA分型設(shè)備，其工作穩(wěn)定性和分析能力依賴于規(guī)范的測試和調(diào)試流程。通過全面的設(shè)備測試，包括性能驗(yàn)證、樣本一致性、污染控制、信號(hào)靈敏度與數(shù)據(jù)精度檢測，能夠有效確保儀器長期高效運(yùn)行，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析提供可靠保障。
建議每間實(shí)驗(yàn)室在設(shè)備正式投入使用前完成一次完整的設(shè)備性能評(píng)估，并建立周期性測試與維護(hù)檔案，以確保系統(tǒng)始終處于最優(yōu)工作狀態(tài)。
杭州實(shí)了個(gè)驗(yàn)生物科技有限公司
