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ABI 7500實時熒光定量PCR儀是由Applied Biosystems公司開發(fā)并由賽默飛（Thermo Fisher Scientific）整合運營的一款經(jīng)典qPCR平臺。自推出以來，該儀器憑借其優(yōu)良的性能表現(xiàn)、穩(wěn)定的熒光檢測系統(tǒng)、廣泛的適用性與成熟的軟件支持，成為全球科研機(jī)構(gòu)、臨床檢測實驗室以及生物技術(shù)企業(yè)廣泛使用的分子檢測工具。
ABI 7500以其精確的熒光定量能力、高度自動化的操作界面和靈活的實驗設(shè)計支持，已成為實時PCR技術(shù)在各類分子生物學(xué)實驗中應(yīng)用的標(biāo)志性設(shè)備之一。
ABI 7500基于實時熒光定量PCR（Real-Time Quantitative PCR）技術(shù)工作，其核心是通過熒光染料或熒光探針實時監(jiān)控PCR擴(kuò)增反應(yīng)中目標(biāo)核酸的復(fù)制情況。熒光信號的強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物量直接相關(guān)，系統(tǒng)通過監(jiān)測每個循環(huán)中的熒光變化，推算出初始模板濃度。
在PCR反應(yīng)中，熒光信號通常通過以下兩種策略生成：
非特異性染料法（如SYBR Green）：與所有雙鏈DNA結(jié)合，當(dāng)擴(kuò)增產(chǎn)物形成時，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
特異性探針法（如TaqMan探針）：探針結(jié)合靶序列，被Taq酶裂解釋放熒光基團(tuán)，產(chǎn)生特異性信號。
Ct值（Cycle Threshold）指熒光信號首次顯著高于背景的循環(huán)數(shù)。Ct值越小，表明樣本中靶基因起始拷貝數(shù)越多，反之亦然。ABI 7500通過準(zhǔn)確測定Ct值，實現(xiàn)對核酸分子的絕對或相對定量分析。
絕對定量：建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以Ct值對應(yīng)拷貝數(shù)。
相對定量：利用ΔCt或ΔΔCt方法，計算基因表達(dá)量相對于內(nèi)參基因或參照組的變化倍數(shù)。
ABI 7500主要由四大核心模塊構(gòu)成，分別負(fù)責(zé)樣品溫控、熒光采集、系統(tǒng)控制與軟件數(shù)據(jù)分析：
樣本容量為96孔標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)板。
加熱模塊采用高導(dǎo)熱金屬材質(zhì)，溫控準(zhǔn)確，升溫速率約為2.5℃/秒，滿足標(biāo)準(zhǔn)PCR程序。
溫度均勻性控制在±0.5℃，確保每個孔位反應(yīng)一致。
配備高靈敏度光學(xué)采集系統(tǒng)，支持多通道檢測，常見為FAM、VIC、ROX、SYBR、NED等。
采用光纖傳輸與CCD成像技術(shù)，熒光信號捕捉迅速且精確。
可實現(xiàn)多重反應(yīng)，一孔檢測多個靶標(biāo)，提高檢測效率。
控制系統(tǒng)通過計算機(jī)操作，兼容Windows操作環(huán)境。
軟件內(nèi)置標(biāo)準(zhǔn)操作流程模板，便于快速實驗設(shè)置。
實驗運行中可實時顯示擴(kuò)增曲線和熒光變化圖，直觀掌握反應(yīng)過程。
ABI 7500配套軟件支持定量分析、溶解曲線分析、基因分型、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制等功能。
支持Excel、PDF等格式導(dǎo)出，便于統(tǒng)計分析與文檔歸檔。
提供實時質(zhì)控提示，協(xié)助用戶發(fā)現(xiàn)反應(yīng)異常或污染。
ABI 7500可檢測低至個位拷貝的核酸模板，適用于高靈敏度的樣本檢測需求，如病毒載量、殘余DNA檢測、單細(xì)胞分析等。
支持多達(dá)5種熒光染料同時運行，能夠?qū)崿F(xiàn)一孔多靶的多重反應(yīng)，大幅提升數(shù)據(jù)通量和實驗效率。
儀器在連續(xù)高強(qiáng)度運行環(huán)境下仍保持?jǐn)U增一致性，適合臨床實驗室和生物樣本檢測中心的大批量檢測任務(wù)。
無需編程基礎(chǔ)即可完成實驗設(shè)計，圖形化界面、拖拽式設(shè)置，降低使用門檻，適合初學(xué)者與經(jīng)驗用戶。
開放式平臺，兼容絕大多數(shù)商業(yè)化試劑盒與通用耗材，無需專屬配套產(chǎn)品，節(jié)省實驗成本。
ABI 7500廣泛應(yīng)用于科研和臨床領(lǐng)域，主要包括：
通過ΔΔCt方法評估不同處理、組織或時間點間的mRNA表達(dá)變化。
可用于疾病模型研究、藥物機(jī)制分析、基因調(diào)控研究等。
適用于各種病毒如HBV、HCV、HIV、SARS-CoV-2等核酸載量的準(zhǔn)確測定。
常用于醫(yī)院、疾控中心的臨床診斷與流行病學(xué)研究。
配合TaqMan探針，識別SNP、插入缺失突變（INDEL）等遺傳位點。
適用于腫瘤分子分型、個體化用藥篩查、遺傳病基因攜帶檢測。
利用不同熒光探針同時檢測等位基因，進(jìn)行人群基因型分析。
常用于法醫(yī)DNA鑒定、親緣關(guān)系確認(rèn)、群體遺傳結(jié)構(gòu)研究。
在生物制藥過程中監(jiān)測重組細(xì)胞殘留核酸，符合GMP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
ABI 7500的操作流程經(jīng)過長期優(yōu)化，保證高重復(fù)性與結(jié)果穩(wěn)定性，標(biāo)準(zhǔn)操作流程如下：
提取DNA或RNA，純化并定量。
配制熒光PCR反應(yīng)液，包括引物、探針或染料、模板等。
將反應(yīng)體系分裝至96孔PCR板，封板后輕離心去除氣泡。
打開軟件，選擇合適的模板或自定義反應(yīng)程序與熒光通道。
設(shè)定反應(yīng)參數(shù)：變性溫度、退火溫度、循環(huán)次數(shù)等。
插入反應(yīng)板，啟動程序，儀器自動進(jìn)行熱循環(huán)與熒光監(jiān)測。
觀察擴(kuò)增曲線、熔解曲線（適用于SYBR Green法）判斷反應(yīng)狀態(tài)。
分析Ct值，計算表達(dá)倍數(shù)或載量，輸出定量結(jié)果圖表。
ABI 7500提供多層次數(shù)據(jù)質(zhì)量評估機(jī)制，幫助用戶判斷反應(yīng)是否成功：
擴(kuò)增曲線形態(tài)：標(biāo)準(zhǔn)S型曲線表明反應(yīng)正常；斜率過緩或平臺期波動需注意模板質(zhì)量或反應(yīng)體系問題。
熔解曲線分析：適用于SYBR Green法，單一峰值代表產(chǎn)物特異性好。
重復(fù)孔間差異：重復(fù)Ct值差值應(yīng)＜0.5，確保擴(kuò)增一致性。
陰陽性對照分析：設(shè)置陽性模板與陰性對照以判斷實驗污染或體系失效。
為了保障ABI 7500長期運行穩(wěn)定，用戶在使用過程中應(yīng)注意：
定期清潔光路窗口與樣品槽，防止灰塵影響熒光信號。
使用高質(zhì)量封板膜避免蒸發(fā)造成熒光漂移。
軟件定期更新，保持?jǐn)?shù)據(jù)分析模塊最新。
避免反應(yīng)體系混合過程中產(chǎn)生氣泡，影響讀數(shù)。
實驗后及時導(dǎo)出數(shù)據(jù)并進(jìn)行備份存檔。
盡管ABI 7500已被廣泛應(yīng)用并形成穩(wěn)定用戶群，但隨著技術(shù)演進(jìn)，實時熒光定量PCR未來仍有以下發(fā)展趨勢：
多重擴(kuò)增能力提升：更高通道數(shù)、更高光學(xué)分辨率。
通量升級與自動化聯(lián)動：與自動加樣、提取系統(tǒng)對接，實現(xiàn)全流程一體化。
便攜化應(yīng)用拓展：適應(yīng)現(xiàn)場快速檢測需求，如突發(fā)疫情應(yīng)急檢測。
AI輔助數(shù)據(jù)分析：引入機(jī)器學(xué)習(xí)算法優(yōu)化曲線識別與異常判斷。
與數(shù)字PCR融合：進(jìn)一步提升超低豐度靶標(biāo)的定量能力。
ABI 7500作為經(jīng)典平臺仍具備拓展?jié)摿?，特別是在臨床分子診斷領(lǐng)域，其穩(wěn)定性與可驗證性是許多實驗室選擇其為主力設(shè)備的關(guān)鍵因素。
賽默飛ABI 7500實時熒光定量PCR儀憑借其堅實的技術(shù)基礎(chǔ)、高靈敏度、高通量能力與成熟的軟件平臺，已經(jīng)成為分子生物學(xué)實驗室、醫(yī)院檢驗科和生命科學(xué)企業(yè)不可或缺的重要工具。它不僅為科研人員提供高質(zhì)量的核酸檢測結(jié)果，也為臨床分子診斷奠定了堅實基礎(chǔ)。
無論是進(jìn)行基因表達(dá)研究、病毒核酸檢測，還是執(zhí)行藥物篩選和遺傳突變分析，ABI 7500都能提供準(zhǔn)確、可靠、高效的數(shù)據(jù)支持。未來，隨著技術(shù)迭代升級，其應(yīng)用邊界將不斷拓展，為分子生物科學(xué)的發(fā)展持續(xù)注入動力。
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